盾壳霉生长和产孢相关基因cmtert的功能研究植物病理学专业论文.docxVIP

华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书学位论文 华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书 学位论文 是否保密 不 如需保密，解密时间 年 月 日 。 枞翩 l燃烨 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发 表或撰写过的研究成果，也不包含为获得华中农业大学或其他教育机构的学位或证书 而使用过的材料，指导教师对此进行了审定。与我一同工作的同志对本研究所做的任 何贡献均已在论文中做了明确的说明，并表示了谢意。 研究生签名：三．萨冰 时间： w6年 6月ty日 学位论文使用授权书 本入完全了解华中农业大学关于保存、使用学位论文的规定，即学生必须按照学 校要求提交学位论文的印刷本和电子版本；学校有权保存提交论文的印刷版和电子版， 并提供目录检索和阅览服务，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位 论文。本人同意华中农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全 部或部分内容，为存在馆际合作关系的兄弟高校用户提供文献传递和交换服务，同时 注：保密学位论文(即涉及技术秘密、商业秘密或申请专利等潜在需要提交保密的论 学位论文储蜘王豚 导师橼{摊苹 l 签名日期： 加f 6年b月眵‘日 签名日期：汐r占年6月，岁日 万方数据 盾壳霉生长和产孢相关基因CmTERT的功能研究目 盾壳霉生长和产孢相关基因CmTERT的功能研究 目 录 摘 要 i ABSTRACT ．．i i 缩略词表 ．i i i 第一章 前言 ．．1 1．1病原真菌核盘菌的研究进展 1 1．1．1核盘菌的危害 ．1 1．1．2核盘菌的致病机理 ．1 1．1．3核盘菌的生物防治 ．3 1．2盾壳霉的研究进展 ．4 1．2．1盾壳霉的分布及生物学特性 4 1．2．2盾壳霉防治核盘菌的机理 5 1．2．3盾壳霉的应用 ．6 1．2．4盾壳霉的分子生物学研究进展 7 1．3端粒酶逆转录酶的研究进展 9 1．3．1端粒的结构和功能 9 1．3．2端粒酶和端粒酶逆转录酶 ．10 1．3．3端粒酶逆转录酶在多细胞真核生物中的研究进展 1 1 1．3．4端粒酶逆转酶在单细胞真核生物中的研究进展 11 1．3．5端粒长度的检测技术 一12 1．4研究目的及意义 ．．12 第二章基因CmTERT突变体的生物学功能研究 ．14 2．1试验材料 14 2．1．1菌株 14 2．1．2载体 14 2．1．3培养基 14 2．1．4试剂 15 2．1．5主要仪器 16 2．2方法 。16 万方数据 华中农业大学2016届硕士研究生学位论文2．2．1基因CmTERT的克隆 华中农业大学2016届硕士研究生学位论文 2．2．1基因CmTERT的克隆 16 2．2．1．1 DNA的提取 1 6 2．2．1．2总RNA的提取 。16 2．2．1．3 cDNA的合成 ．1 7 2．2．1．4 CmTERT基因全长和CDS克隆 17 2．2．2盾壳霉基因CmTERT表达动态分析 。18 2．2．3基因CmTERT的敲除 18 2．2．3．1同源重组的原理 。18 2．2．3．2 PCR扩增获得目标基因的上下游序列和HYG片段 19 2．2．3．3融合片段的获得 。19 2．2．3．4 UHY和YGD测序验证 20 2．2．3．5盾壳霉ZS-1原生质体的制备 20 2．2．3．6 PEG介导的原生质体转化 。21 2．2．3．7 CmTERT敲除转化子的验证 2 1 2．2．4盾壳霉菌株的生物学表型观察 ．22 2．2．4．i盾壳霉菌株的菌落形态特征观察 ．22 2．2．4．2盾壳霉菌株的菌丝尖端观察 ．22 2．2．4．3盾壳霉菌株的生长速度测定 ． 22 2．2．4．4盾壳霉菌株的产孢量测定 ．23 2．2．4．5盾壳霉菌株的生物学产量测定 ．23 2．2．4．6盾壳霉菌株抗生能力的测定 ．23 2．2．4．7盾壳霉菌株寄生菌核能力的测定 ．23 2．2．4．8 NBT染色检测活性氧含量 ．．24 2．3结果与分析 24 2．3．1 ZS-1TN4685 T-DNA插入位点处基因的序列分析 。24 2．3．2 CmTERT基因表达动态分析 26 2．3．3 CmTERT敲除转化子的获得与验证 26 2．3．3．1 CmTERT上游片段U和下游片段D及潮霉素基因的获得 。26 2．3．3．2融合片段UHY和YGD的获得 ．27 2．3．3．3 CmTERT敲除转化子的PCR验证 27 II 万方数据 堕至墨竺兰塑兰塑塑茎墨里鱼!竺三堕塑丝塑壅2．3．4 堕至墨竺兰塑兰塑塑茎墨里鱼!竺三堕塑丝塑壅 2．3．4 CmTERT敲除转化子的生物学表型 29 2．3．4．1 CmTER