高效液相色谱原理、硬件及常见问题解决方法.pdfVIP

高效液相色谱 原理、硬件及 常见问题解决方法 高效液相色谱在中药分析中应用 自2000年版开始，中国药典一部收载的HPLC 法含量测定308 项 （中药材 170项，中药成方制剂138项），2005年版HPLC法含量测定项目进一步增 加 （中药材291项，中成药429 项），2010 年版则达到1643项 （中药材 587项，提取物26项，中成药1030项）。 1200 1000 800 中药材 600 中成药 400 提取物 200 0 2000年版 2005年版 2010年版 液相色谱原理 基本原理：溶于流动相(mobile phase) 中的各组分经过固定相时，由于与固 定相(stationary phase)发生作用 （吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和） 的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。 关键点：  流动相  固定相  相互作用 液相色谱原理  分离度公式 塔板数 选择性因子 容量因子 − 1 ′ = × × 4 ′ + 1 Rs ：分离度；一般要求大于1.5。分离度越大越好。 N ：理论塔板数；与色谱柱填料粒度、长度、均一性等相关；理论板数越高越好。 α：选择性因子；与色谱柱键合相、硅胶封端技术等相关；选择性因子越大越好。 k ：容量因子；与化合物性质、流动相、键合相相关；容量因子在0- 10范围内影响大。 关于分离的事实: • 压力大小对分离度没有任何的影响! • 压力是使用小颗粒色谱柱带来的一个负面效应! • 压力不参与任何分离! 液相色谱原理  分离度与选择性因子、理论板数及容量因子 液相色谱原理  分离模式的选择  根据化合物的性质：分子大小及 溶解性来选择分离的模式。  一般情况下，遵循相似相容原 理。  根据选定的模式进行色谱柱的选 择。 常见的高效液相色谱的分离模式 主要适用范围 色谱类型 固定相 流动相 (Compound (Mode) (Stationary Phase) (Mobile Phase) Separated) 正相色谱 硅胶，氨基、氰基、二 在水中绝对不溶解的物 有机溶剂 (Normal-Phase) 醇基键合硅胶…… 质或同分异构体 反相色谱 C18、C8, C2键合硅胶 水/有机溶剂