产前暴露于纳米氧化锌对大鼠子代脑发育及成年期行为学特性的影响口腔临床医学专业论文.docxVIP

硕士学位论文 硕士学位论文 产前暴露于纳米氧化锌对大鼠子代脑发育 及成年期行为学特性的影响 硕士研究生：冯晓黎 指导老师：邵龙泉教授 摘要 研究背景 纳米材料是一种由基本颗粒组成的粉状、团块状的天然或人工材料，基本 颗粒的一个或多个三维尺寸在1至100纳米之间，并且这一基本颗粒的总数量 在整个材料的所有颗粒总数中占到50％以上。近年来，纳米技术与医学结合紧 密，被广泛被应用于医学的基础研究、诊断与治疗，及药物和生物材料的开发 等方向。然而值得注意的是，虽然纳米材料的固有性质并非是无害的，但是它 能够在细胞、亚细胞、蛋白甚至基因水平对生物学行为产生影响。目前有文献 报道，纳米材料可以通过多种途径进入人体，随血液进入靶器官发生二次沉积， 并且通过胞饮作用跨越细胞膜，进入细胞浆或停留在细胞器中，进而引发一系 列损伤效应。因此，对纳米材料生物安全性的研究已经引起了全世界的广泛关 注。 纳米材料在口腔医学领域的应用，对传统口腔材料的改性和创新具有重要 意义。在纳米金属氧化物中，纳米氧化锌具有十分广泛的应用前景和价值，其 在口腔医学领域中，多用于改善传统口腔材料，例如牙科复合树脂、根尖封闭 剂、种植体表面涂层材料的生物学性能以及机械性能。纳米氧化锌在口腔医学 领域内的广泛应用，使其可以通过多种途径进入人体，并随血液在各种器官， 如肺、肝脏及肾脏中发生二次聚集。目前，越来越多的文献报道纳米氧化锌甚 至可以穿越血脑屏障进入到脑组织中。不仅如此，由于血脑屏障结构和功能的 万方数据 摘要 摘要 成熟是随着个体发育的发生而逐渐完成的，因此在脑组织发育期间接触纳米氧 化锌的安全风险会远远高于成熟期的暴露风险。尽管胎盘屏障可以阻挡部分有 害物质进入胎儿体内，但是这种生理性的保护作用是非常微小的。如果在妊娠 期间母亲存在接触纳米颗粒的风险，那么这些纳米颗粒很可能穿过胎盘屏障进 入胎儿体内，并分布到胎儿脑组织中，影响到胎儿的脑部发育。 目前，虽然国内外对于纳米氧化锌的毒理学研究逐渐增加，但是关于纳米 氧化锌的产前暴露，对胚胎期中枢神经系统发育的影响尚无明确定论，关于子 代成年后神经行为学的改变更是知之甚少。因此，本研究设想通过建立产前暴 露于纳米氧化锌的胎鼠模型，检测新生乳鼠脑组织的结构及相关生化指标的水 平，探讨纳米氧化锌神经毒性的具体表现及主要毒性机制，并对子代大鼠进行 成年期的行为学分析，以探讨其学习记忆行为方式的改变。 研究目的 1．观察妊娠期经口染毒的纳米氧化锌穿越母鼠的胎盘屏障进入胎鼠体内，分布 至胎鼠脑组织及全身其他脏器的情况。 2．研究纳米氧化锌的产前暴露对子代大鼠脑组织发育产生的不良影响。 3．探讨纳米氧化锌导致神经毒性的相关作用机制。 4．探讨纳米氧化锌的产前暴露对子代大鼠成年期学习记忆能力的影响。 材料与方法 第一部分：纳米氧化锌的材料表征 1)透射电子显微镜检测纳米颗粒的原始粒径和形状。 2、)动态光散射仪检测纳米颗粒在水溶液中的粒径分布和电位值。 3)能谱仪检测纳米颗粒的化学元素含量。 4)X线衍射仪检测纳米颗粒的晶体构象。 5)N2吸附BET法检测纳米颗粒的比表面积。 61鲎试剂凝胶法检测纳米颗粒的内毒素水平。 II 万方数据 硕士学位论文7)电感耦合等离子体质谱检测纳米颗粒在人工胃液中的溶解度。 硕士学位论文 7)电感耦合等离子体质谱检测纳米颗粒在人工胃液中的溶解度。 第二部分：动物模型的建立及脑损伤指标的研究 1)动物模型的建立 造模前用含有0．05％(v／v)吐温80的生理盐水将纳米氧化锌颗粒分散均匀， 然后对妊娠期第3 d至第20 d的SD大鼠进行样品混悬浮液(500 mg／kg体重) 的灌胃处理，给与对照组的大鼠相同体积生理盐水的灌胃处理。 2)主要器官的比重系数 分别选取实验组及对照组中出生第2 d的乳鼠，测量体重后将乳鼠断颈处死。 即刻收集乳鼠的心、肝、脾、肺、肾及脑组织，测量重量后计算各器官的比 重系数。 3)锌元素的生物学分布 收集出生第2 d乳鼠的心、肝、脾、肺、肾和脑组织，以及出生21 d的乳鼠 和母鼠的血液，用硝酸及H202溶液消化，直至组织和血液消化完全，采用 ICP．MS检测各样品中Zn元素的含量。 4)脑组织的病理改变 收集出生第2 d乳鼠的脑组织，用4％的福尔马林浸泡完全后，制作石蜡切 片。常规苏木精．伊红(HE)染色观察脑组织的病理改变。此外，分别采用飚．67、 TUNEL免疫组织化学技术观察神经细胞的增殖及凋亡情况。 5)神经细胞超微结构的改变 将收集到的新鲜脑组织立即浸泡在3％的戊二醛溶液中，固定完全后制作环 氧树脂包埋块，常规染色后采用TEM观察纳米颗粒在脑组织中的定位及神 经细胞的超微结构改变。 第三部分：纳米氧化锌神经毒性的机制研究 1)组织匀浆的制备及蛋白浓度的测定 分别收集