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多西环素含量及有关物质方法学验证方案 扬州联博药业有限公司 二00九年十二月 实施人: 审核人: 批准人: 目录 TOC \o 1-5 \h \z ?验证概述 1 ?验证用试剂及对照品 1 ?验证□的 1 ?验证范围 1 ?验证项目及可接受标准 1 ?实施验证的人员 1 ?所用的仪器及设备 1 ?验证内容 2 9?验证结论 13 1 ?验证概述 根据EP6. 0中对多西坏素含量及有关物质测定方法验证的要求，本实验室采用 多西环索检测中用到的工作对照品盐酸多西环索替代多西环索进行方法学验证。在 含量测定项下，分别就专属性、定量限、检测限、线性、冋收率和精密度进行方法 学验证。另外，在本实验室研究该方法的耐受性试验，同时对该方法进行同人不同 柱不同仪器和不同人同柱同仪器条件下的相关实验。 冇关物质方法学验证中，我们对多西环索中杂质美它环索，6-表多西环索的定 量限，检测限，线性和加样冋收率进行验证。在耐用性试验中，通过适当改变检测 条件，评价系统适用性的，对测定溶液的稳定性进行连续10h的跟踪测定。 2.验证用对照品及试剂 2. 1对照品信息 表1.验证屮使用对照品信息 对照品名称 批号 生产厂家 6 ■表多西环素 美他环素 盐酸多西环索 2. 2试剂信息 表2.验证中使川试剂信息 对照品名称 批号 主产厂家 叔丁醇 磷酸二氮钾 硫酸氢化四丁基馁 乙二胺四乙酸二钠 .验证口的：为了完善多西环素屮含量及有关物质测定方法的验证。 ?验证范围：多西环素含量及有关物质的测定。 ?实施验证的人员： 康飞刚，彭红彦 6?所用的仪器及设备 表3.验证屮所使用的仪器设备 仪器 自编号 校验日期 有效期 HPLC/Waters Z004 2009. 12. 27 2010. 12. 26 HPLC/Waters Z005 2009. 12. 27 2010. 12. 26 电子天平 Z001 7.验证项目及可接受标准  表4.验证项口及可接受标准 验证项目 可接受标准 专属性 分离度 美他坏索和6■表多西环索 RM1.25 6 ■表多西环素与多西坏素 R22.0 理论塔板 美它环索 N 2 2000 6 ■表多西多西环 NM2000 多西多四环 N2500 检测限 信噪比23 多西环索定量限浓度 3.0ug/ml 美它环素浓度 3.0ug/ml 6-表多西环素浓度 3.0ug/ml 定量限 信噪比$10 多西环素定最限浓度 3.0ug/ml 美它环素浓度 3.0ug/ml 6-表多西环索浓度 3.0ug/ml 方法耐受性 分离度 美它环素与6-表多西环素 RN1.25 6-表多西环素与多西环索 R22.0 线性 含量 R N0. 9995 有关物质 R 0. 999 回收率 含量 95?105. 0% 有关物质 85?115. 0% 精密度（6次含量测定误差） RSDW2.0 溶液稳定性（10h内） RSDW2.0 同人不同柱不同仪器、不同人同柱同仪器和同人同柱同仪器 RSDW5.0 8?验证内容 8. 1测定仪器及检测条件 8. 1. 1仪器： HPLC/water （一）自编号：Z004 泵：Waters 515 检测器：2487紫外检测器 工作站：N2000工作站 进样器：7725i手动进样器 8. 1.2测定条件 柱（一）：P-LRP, 250*4. 6mm*8um, Serial No. 流速：1. Oml/min柱温：60°C检测波长：254nm 流动相配制： 0. 2mol/L的KH2P04溶液：称取27. 2g KH2P04加水1000ml溶解混匀。 0. 2mol/L的NaOIl溶液：称取 0g Na Oil加水1000ml溶解混匀。 pH二 0磷酸盐缓冲液:取50ml 0. 2mol /L KH2PO4溶液，加入46. 80ml 0. 2mol/L的NaOH溶液，用水稀释到200ml混匀。 流动相:称取60?0g叔丁醇于1000ml容量瓶中加约200ml水溶解,加400ml 磷酸盐缓冲液（pll=8. 0）, 50ml 10g/L硫酸氢化四丁基钱溶液（用稀NaOII调pll二8. 0） 和10ml 40g/L乙二胺四乙酸二钠溶液（用稀NaOH调pH二 0）,加水稀释至1000ml 混匀,0. 45um抽滤备用。 8. 2专属性试验 8. 2. 1系统适用性试验 精密称取美它环素对照品20mg、6-表多曲环素对照品20鳴、盐酸多西环素工 作对照品20mg,分别到25ml容量瓶中，用0.01mol/L盐酸溶液溶解并稀释到刻度 并依次标示为 1#，2#, 3#。分别吸取 1. 0ml 1#, 1. 5ml 2#, 4. 0ml3#至同—25ml 容量瓶中标示为4#,用0. 01mol/L盐酸溶解并稀释到刻度。 在测定条件下进样