阿法替尼逆转abcb1转运体介导的卵巢癌化疗多药耐药性及其作用机制研究药剂学生物药剂学专业论文.docxVIP

博士学位论文结果 博士学位论文 结果 1．阿法替尼体外水平逆转ABCBl介导的卵巢癌化疗MDR 紫杉醇对敏感株A2780及耐药株A2780T细胞的半数抑制浓度值(IC50)分 别为0．039士o．003 r朋及1 98．92 4-14．851．tM；阿霉素对敏感株A2780及耐药株 A2780T细胞的IC50分别为1．17-4-0．061．tM及27．69-4-2．111．tM；紫杉醇对敏感株 SKOV3及耐药株SKOV3一DDP细胞的IC50分别为0．033 4-0．002rtM及41．79 3．671xM；阿霉素对敏感株SKOV3及耐药株SKOV3．DDP细胞的IC50分别为0．97 4-0．071xM及18．13 4-1．541xM。以上敏感株与耐药株对化疗药物的敏感性差异均具 有统计学意义(尸0．01)，表明本实验中所采用的两种耐药株细胞相较于两种敏 感株细胞，对ABCBl转运体底物性化疗药物紫杉醇及阿霉素具有高度的耐药性。 卵巢癌耐药株A2780T细胞内ABCBl转运体的蛋白表达水平及MDRl基 因mRNA水平分别是敏感株A2780细胞内的83．3倍及142．9倍；卵巢癌耐药株 SKOV3．DDP细胞内ABCBl转运体的蛋白表达水平及MDRl基因mRNA水平 分别是敏感株SKOV3细胞内的37．0倍及23．3倍。 阿法替尼可浓度依赖性的显著降低紫杉醇及阿霉素对ABCBl高表达的耐药 卵巢癌细胞A2780T及SKOV3．DDP的IC50。联用0．625山VI、1．251．tM及2．5州 的阿法替尼时，紫杉醇对A2780T细胞的IC50分别为115．53 4-6．651xM、19．74 4- 1．19pM及8．86 4-0．72“M，较未联用阿法替尼组紫杉醇的IC50分别显著下降了 1．72倍、10．08倍及22．45倍(尸0．01)：联用0．375}tM、O．75rtM及1．5rtM的阿 法替尼时，紫杉醇对SKOV3．DDP细胞的IC50分别为23．53 4-2．470M、9．82 4- 0．80I_tM及5．75 4-0．47pM，较未联用阿法替尼组紫杉醇的IC50分别显著下降了 1．78倍、4．26倍及7．27倍(尸0．01)；联用0．6259M、1．251．tM及2．5州的阿法 替尼时，阿霉素对A2780T细胞的IC50分别为6．24 4-0．37rtM、3．93 4-0．22rtM及 1．57 4-0．131xM，较未联用阿法替尼组阿霉素的IC50分别显著下降了4．44倍、7．05 倍及17．64倍(P0．01)；联用0．375rtM、0。75I．tM及1．5rdVl的阿法替尼时，阿 霉素对SKOV3．DDP细胞的IC50分别为9．17 4-1．051．tM、3．58 4-0．29rtM及1．25 4- 0．13Ⅲx,t，较未联用阿法替尼组阿霉素的IC50分别显著下降了1．98倍、5．06倍及 11| 万方数据 摘要14．50倍(尸O．01)。然而，阿法替尼不改变紫杉醇及阿霉素对ABCBl低表达 摘要 14．50倍(尸O．01)。然而，阿法替尼不改变紫杉醇及阿霉素对ABCBl低表达 的卵巢癌敏感株A2780及SKOV3细胞的IC50。此外，阿法替尼逆转耐药卵巢癌 细胞对紫杉醇及阿霉素MDR的效果，强于相同浓度的可逆性的TKIs类药物拉 帕替尼及经典的ABCBl转运体抑制剂维拉帕米(10肛M)。 敲低A2780T及SKOV3．DDP细胞内ABCBl转运体的表达水平，可显著降 低紫杉醇及阿霉素对A2780T及SKOV3．DDP细胞的IC50(P0．01)。联用阿法 替尼可进一步显著降低紫杉醇及阿霉素对A2780T／ABCBl一及 SKOV3．DDP／ABCBl一的IC50(PO．01)。 2．阿法营尼体内水平逆转ABCBl介导的MDR 对照组、紫杉醇组、阿法替尼组及阿法替尼与紫杉醇联用组肿瘤平均重量 分别为0．707士0．229 g、0．655-4-0．289 g、0．247 4-0．088 g及O．113士0．079 g。阿法 替尼与紫杉醇联用不仅显著延缓了荷瘤裸鼠背部A2780T细胞异种移植瘤的生 长，抑制率为84．02％，而且显著诱导了肿瘤坏死及肿瘤退行性生长。 3．阿法替尼体内外水平均可显著增强紫杉醇诱导的耐药卵巢癌细胞的凋亡作用 阿法替尼体外水平可浓度依赖性的显著增加紫杉醇诱导的卵巢癌A2780T 及SKOV3．DDP细胞的凋亡率(尸0．01)。此外，体内TUNEL实验结果显示， 阿法替尼与紫杉醇联用组裸鼠肿瘤组织镜下可见大量阳性染色的细胞核，且核 破裂及核溶解的细胞比例增加，表明该组肿瘤组织发生了显著的细胞坏死。 4．阿法替尼抑制ABCBl转运体的外排功能，激活其