基于液质联用技术分析食管癌细胞中异常表达骨架结合相关蛋白的研究化学;分析化学专业论文.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 南开大学硕士研究生学位论文中文摘要 南开大学硕士研究生学位论文 中文摘要 食管癌是消化道系统的一种常见恶性肿瘤，但是目前对于食管癌的病因 和发病机制尚不十分清楚。Ezrin是一种膜．细胞骨架连接蛋白，Fascin是一种细 胞骨架捆绑蛋白(在此将二者统称为骨架结合相关蛋白)。研究表明：二者均在 食管癌细胞中异常表达，并与肿瘤的发生发展、侵袭、转移过程密切相关，但 确切的作用机制尚待深入研究。本论文选择Ezrin和Fascin作为靶标蛋白，建立 了基于LC．MS技术的蛋白质组学研究方法。论文内容分3部分： 首先，介绍了LC．MS技术在蛋白质鉴定分析中的策略、方法和应用，并概 述了骨架结合相关蛋白Ezrin和Fascin在食管癌的研究中的生物学意义。 其次，建立了食管癌细胞骨架连接蛋白Ezrin的分离鉴定策略和方法。并分 别在三个不同系统中，采用IP靶标蛋白富集提取、LC／MS／MS分析、蛋白质生 物信息学检索以及手工解谱等技术，研究鉴定了食管癌细胞中Ezrin蛋白翻译后 修饰、相互作用蛋白，分析了转移生长因子对Ezrin修饰和作用蛋白的影响以及 主要差异性蛋白的生物学意义。结果表明，我们在鉴定出Ezrin磷酸化修饰的同 时还发现了一些未知修饰；鉴定出一种可能与Ezrin相互作用的蛋白复合体 E面rl／11rGA5；在刺激因子影响下鉴定出两种可能与Ezrin相互作用的激酶。 再次，建立了食管癌细胞骨架捆绑蛋白Fascin的分析策略和方法。主要采 用基于Pull．down策略提取、LC／MS／MS鉴定，以及生物信息学分析等技术，研 究了食管癌细胞中Fascin存在形式，是否存在复合蛋白，并分析了与其可能相 互作用的蛋白质组。实验结果表明，我们鉴定如一些角蛋白(keratin)，推测这些 蛋白可能与Fascin具有相互作用。 关键词：液相色谱．串联质谱食管癌Ezrin Fascin蛋白复合物翻译后修饰 南开大学硕士研究生学位论文Abstract 南开大学硕士研究生学位论文 Abstract Esophageal Squamous Cell Carcinoma(ESCC)is one of the common malignant tumors in alimentary canal system．But at present，the exact mechanism of ESCC is not clear．According to the scientific researclh Ezrin is a cross-linker of the actin cytoskeleton and plasma membrane and Fascin is an actin binding cytoskeleton protein,both of them are dosdy related to ESCC，and play an important role in the invasion and metastasis of tumor cells．In this paper,we choose Ezrin and Fascin as two target proteins to establish proteomic methofor ESCC research based-on Liquid Chromatography-Mass Spectrometry(LC—MS)technology．In particular,there al e three parts i11 my thesis such弱follows： Firstly,introduce the baSic methods and applications of LC—MS in proteomic field，and summarize the biological significance of the cytoskeleton association proteins of Ezrin and Fascin during the recent years． Secondly,establish a strategy to separate and analyze the Ezfin．We discnss the post—translational modifications，protein-protein interactions，interacting complexes of Ezrin with CO·immunoprecipitation,LC／MS／MS and bioinformatic retrieval tools am