法尼基焦磷酸合成酶基因的原核表达及功能分析微生物与生化药学专业论文.docxVIP

独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我 独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我 所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成 果，也不包含为获得塑兰垦壅些盘堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我 一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名：琴欠当乙 签字日期： o t)，6年 6月2 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解塑兰堡垒些盘堂有关保留、使用学位论文的规定，有权保留 并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权塑兰垦盛 些盘鲎可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫 描等复制手段保存、汇编学位论文。 (保密的学位论文在解密后适用本授权书) 学位论文作者签名：弓R当2． 导师张前方函 签字日期：0 o，6年6月≥日 签字日期：吱。t b年6月沙日 学位论文作者毕业后去向： 工作单位： 电话： 通讯地址： 邮编： 摘要 摘要 陆地棉是世界最重要的纤维和油料经济作物，但是其产量受到害虫和病原菌的严 重威胁。蚜虫和棉铃虫作为主要的农业害虫，使得每年陆地棉产量遭遇巨大损失。但 是，由于害虫抗药性的出现以及农药对其他有机体(例如人和动物)的负面作用，长 远来看，杀虫剂在害虫防治方面不是最好的选择。当被害虫取食后，植物会散发一系 列有机挥发物，这些挥发物可以吸引害虫的天敌，从而击退害虫。因此，能够调节虫 害诱导挥发物释放的基因的发掘与鉴定对于我们研究植物的自我防御的分子机制是 相当重要的。 在本研究中，分别克隆和鉴定了陆地棉中2个用坶基因一一G力以S1和G办删， 并对其基因序列特征、基因表达特点、酶活力以及烟蚜茧蜂对(E)-fl一法尼烯的电生理 和趋向反应等方面做了全面研究。主要结果如下： 1．陆地棉FPS基因的克隆及序列分析：在NCBI数据库中对陆地棉FPS基因序 列比对表明，GhFPSl和来自亚洲薯、黄芪、乌拉尔甘草的FPS氨基酸序列具有 810／0-89％的相似度。GhFPS2的氨基酸序列和来自向日葵、人参、雷公藤的FPS氨基 酸序列具有830／0-88％的相似性。聚类分析表明，陆地棉、亚洲棉和土沉香的法尼基 焦磷酸合酶氨基酸序列属于同一分枝，表明这些植物在FPS进化方面具有较近关系。 2．陆地棉FPS的表达特性研究：运用RT-PCR方法对陆地棉中FPS表达特性分 析表明，在未处理的陆地棉植株中，GhFPSJ和G办删在叶子中表达量明显高于根、 茎、叶柄等其它组织的表达量。当陆地棉被茉莉酸甲酯处理16 h后，被处理植株的4 处组织中GhFPSJ和GhFPS2的表达量都高于未处理植株，并且在叶和茎中GhFPSJ『 的表达量明显高于G乃删，根和叶柄中GhFPS2的表达量明显高于GhFPSl。当陆 地棉植株被水杨酸甲酯处理16 h后，被处理植株的根、茎、叶中GhFPSl的表达量 明显高于GhFPS2，然而在叶柄中G忍FPJ驼的表达量明显高于僦即SJ『。 3．陆地棉FPS基因的酶活性分析：在大肠杆菌中表达GhF嬲J和GhFPS2基因， 与前体化合物IPP和GPP一起进行体外催化反应来检测陆地棉GhFPSl和GhFPS2 的酶活性，产物通过GC．MS检测。通过质谱检测和与标准物质比对，表明陆地棉法 尼基焦磷酸合酶基因G办即SJ和G办FP∞都可以将底物IPP和GPP转化为一种主要 产物法尼醇。 4．烟蚜茧蜂对法尼醇和(E)-fl-法尼烯的电生理反应及趋向行为研究。选取两天左 右大的烟蚜茧蜂(Aphidius gifuensis)触角来记录其对法尼醇和EflF的电生理反应， 法尼醇和(E)-fl-法尼烯浓度分别为0．01、0．1、l、10、100¨∥gl。结果表明，在O．01、 0．1 p∥pl时，雌雄烟蚜茧蜂对(E)-p．法尼烯均无反应，在1、10、100 p∥gl时，雌茧 蜂的电生理反应值明显高于雄茧蜂；对于法尼醇，在O．01、0．1 Ltg／rtl时，雌雄烟蚜 茧蜂对法尼醇均无反应，在lO¨∥¨l和100“∥pl浓度下，雌茧蜂的电生理反应值明 显高于雄茧蜂，但是在1 u∥pl时，雄茧蜂的电生理反应值稍高于雌茧蜂。在Y．形管 行为实验中，法尼醇和(E)．伊法尼烯亦对雌性烟蚜茧蜂表现出了较强的吸引作用。 关键词 z 法尼基焦磷酸合酶 ;(E)-?-法尼烯:触角电位: 趋向行为 Prokaryotic Prokaryotic Expression and Functional Analysis of Farnesyi P