地西他滨对小鼠淋巴瘤细胞免疫原性的增强作用及机制探索临床医学专业论文.docxVIP

摘要摘 摘要 摘 要 地西他滨(Decitabine，DAC)作为一种新型去甲基化药物，主要用于骨髓 异常增生综合征(Myelodysplastic Syndrome，MDS)及急性髓系白血病(Acute Myeloid Leukemia，AML)的治疗。研究发现DAC可以上调许多免疫相关的分 子，增强肿瘤细胞的免疫原性，在白血病患者的治疗中发现，去甲基化药物可 以诱导产生肿瘤特异性细胞毒性T细胞(Cytotoxic Lymphoctye，CTL)，人们推 测去甲基化药物具有增强抗肿瘤免疫反应的作用。我们选取小鼠T淋巴瘤／淋巴 细胞白血病细胞EL4，建立小鼠淋巴瘤模型，研究DAC对EL4细胞免疫原性的 增强作用并对其机制进行探索。 1．地西他滨诱导小鼠淋巴瘤细胞EL4凋亡 我们用不同浓度的DAC体外处理EL4细胞，通过CCK．8法检测细胞的增 殖情况，发现DAC对EL4细胞的生长抑制作用具有浓度依赖性，0．259M时， 有30％的增殖抑制作用。此时，细胞形态发生了明显变化，呈现出一种不典型 的凋亡状态，且在体内成瘤性也明显下降。经过Amaexin．V／PI双染后，流式检 测发现DAC浓度越高，细胞凋亡越明显，且以早期凋亡为主。 2．地西他滨上调CD80分子 基因表达谱芯片筛查结果显示，DAC处理后EL4细胞肿瘤相关抗原和CD 分子(Cluster of Differentiation)的表达都上调了，其中CD80表达的上调很明 显。我们利用PCR技术和流式细胞仪检测，证实DAC上调EL4细胞CD80在 mRNA和蛋白水平的表达，上调状态在体外能够持续30天左右。同时我们发现 DAC体内治疗也能够上调EL4细胞CD80的表达量。通过对EL4细胞CD80启 动子区甲基化测序，我们发现CD80的表达跟DNA甲基化关系密切。 3． 地西他滨上调OD80强化抗肿瘤免疫反应 在动物实验中，我们发现DAC能够抑制EL4细胞的成瘤性。通过流式细胞 I 摘要仪检测发现，DAC治疗后肿瘤内T细胞侵润明显增多。胞内细胞因子染色结果 摘要 仪检测发现，DAC治疗后肿瘤内T细胞侵润明显增多。胞内细胞因子染色结果 表明：T细胞IL．2和IFN．Y的分泌量也明显增加。利用抗．CD8和抗．CD4单克 隆抗体建立淋巴瘤小鼠CD8+T细胞或CD4+T体内清除模型，发现DAC治疗后 CD8+T参与了抗肿瘤反应。 混合淋巴细胞培养发现DAC处理后的EL4细胞能够有效刺激淋巴细胞增 殖，刺激T细胞分泌IL．2和IFN．Y，当CD80被阻断后，其对淋巴细胞的刺激 能力下降。通过流式分选技术从DAC处理后的EL4细胞中分选出CD80+和CD80一 细胞群，对小鼠进行接种，发现CD80+组小鼠肿瘤生长明显缓慢，且部分肿瘤 会停止生长并缩小，流式分析结果发现CD80+组肿瘤中T细胞和NK细胞的侵 润都显著高于CD80。组，说明DAC诱导CD80上调，增强肿瘤免疫原性，强化 了抗肿瘤免疫反应。 综上，我们的研究发现DAC可以诱导EL4细胞表达多种免疫相关分子，增 强其免疫原性，其中CD80起重要的作用，并首次发现CD80表达跟DNA甲基 化的关系，丰富了免疫调节受表观调控的内容，为去甲基化药物增强免疫治疗 效果提供了新的理论依据和方法。 关键词：地西他滨，去甲基化，CD80，免疫原性，抗肿瘤免疫反应 AbstractDecitabine(DAC)，as Abstract Decitabine(DAC)，as one kind of novel hypomethylating agent，1S mainly used for the treatment of myelodysplastic syndrome(MDS)and acute myeloid leukemia fAML)．It has been proved by recent studies that DAC can up’regulate many lmmune associated molecules，and enhance the immunogenicity of tumor．Clinically, hypomethylating agent can induce cytotoxic lymphocyte(CTL)，which indicates that hypomethylating agent i s potential to improve the anti-tumor immune response·Ⅵk set up lymphoma mice mode to study the mechanism and effectiveness of DAC in enehancing immunoge