除组织中高丰度蛋白对蛋白鉴定的影响及心肌梗死尿蛋白质组分析药理学专业论文.docxVIP

学校代码： 学校代码： 10023 学 号：$2012005073 硕士学位论文 除组织中高丰度蛋白对蛋白鉴定的影响及心肌梗死尿 蛋白质组分析 所 院 中国医学科学院基础医学研究所 北京协和医学院基础学院 姓 名 邹丽莉 指导教师： 孙伟 副研究员 导师小组： 郑德先，佟伟民，郑直，高友鹤， 杨先达 学科专业： 药理学 研究方向： 质谱分析与应用 完成日期： 201 5年5月 万方数据 北京协和医学院硕士学位论文 北京协和医学院硕士学位论文 目录 英文缩略语 ．4 第一部分：去除组织中高丰度蛋白对组织蛋白质组鉴定的影响 6 摘要 ．7 Abstract ．．8 第一章引言 9 第二章材料与方法 ．10 2．1实验材料 ．．1 O 2．1．1实验样品 10 2．1。2主要试剂 10 2．1．3主要耗材 11 2．1．4主要仪器 1 1 2．1．5试剂配制 11 2．2实验方法 ．．12 2．2．1甲状腺、垂体组织蛋白提取 ．．12 2．2．2 Bradford方法测定蛋白浓度 12 2．2．3等质量组织蛋白质样品电泳(SDS．PAGE) ．13 2．2．4免疫去除组织中血清高丰度蛋白 13 2．2．5膜辅助溶液内蛋白酶切 1 4 2．2．6 C18固相萃取 15 2．2．7 LC．MS／MS分析 1 5 2．2．8数据检索 16 第三章实验结果 ．17 3．1去除血清高丰度蛋白后的蛋白回收率 ．．17 3．2去除血清高丰度蛋白样品和原样的一维胶结果 ．．17 3．3低丰度样品和原样定性分析结果 ．．18 3．4定量分析低丰度蛋白和原样共同鉴定到的蛋白 ．．19 第四章讨论 ．20 第五章结论 ．21 参考文献 22 第二部分：基于iTRAQ标记定量的心肌梗死尿和血浆蛋白质组学分析 23 摘要 24 Abstract ． ． ．．． ．．．． ．．． ． ．． ．．． 25 第～章引言 ．26 万方数据 北京协和医学院硕士学位论文第二章材料与方法 北京协和医学院硕士学位论文 第二章材料与方法 ．28 2．1实验材料 ．．28 2．1．1实验样品 28 2．1．2主要试剂 28 2．1 3主要耗材 29 2．1．4主要仪器 29 2．1．5试剂配制 30 2．2实验方法 ．．3 1 2．2．1尿样的收集 31 2．2．2血浆的收集 3 1 2．2．3尿液中蛋白提取 ．．3 1 2．2．4 Bradford方法测定蛋白浓度 3 1 2．2．5等质量蛋白样品电泳(sos．PAGE) 一32 2．2．6免疫去除血浆中血清高丰度蛋白 32 2．2．7膜辅助溶液内蛋白酶切 32 2．2．8 C18固相萃取 34 2．2．9 BCA法测多肽浓度 ．．34 2．2．1 0 iTRAQ定量标记 ．35 2．2．1 1离线高pH反相高效液相色谱分离iTRAQ多肽 35 2．2．12 LC—MS／MS分析 ．35 2．2．1 3数据分析 ．．36 2．2．1 4 Gene Ontology (G0)功能分析及Ingenuity Pathway Analysis(IPA)分 析 ．．36 2．2．1 5 Western blot分析 36 第三章结果 ．37 3．1血浆高丰度蛋白免疫去除效率 ．．37 3．2尿和免疫去除后血浆蛋白质组的定性定量分析 。。37 3．3尿样及免疫去除后血浆样品中的差异蛋白 ．．38 3．4 Gene Ontology(G0)功能分析及Ingenuity PathwayAnalysis(IPA)分析 ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．：；9 第四章讨论 ．46 4．1心肌梗死的病理过程及蛋白质组学研究 ．．46 4．2凝血激活通路 ．．46 4．3线粒体功能障碍及氧化磷酸化通路 ．．48 万方数据 北京协和医学院硕士学位论文4．4动脉粥样硬化通路 北京协和医学院硕士学位论文 4．4动脉粥样硬化通路 49 4．5尿蛋白质组及免疫去除后血浆蛋白质组在心肌梗死生物标志物发现中的作用 比较 ．．52 4．6心肌梗死诊断生物标志物的研究现状 ．．53 第五章结论 ．56 参考文献 57 综述：人类尿蛋白质组：临床实验的重要资源 62 在读期间学术成果 73 致{射 ．．74 独创性声明 ．75 万方数据 北京协和医学院硕士学位论文英文缩略语 北京协和医学院硕士学位论文 英文缩略语 Abbreviations BSA bovine serum albumin 牛血清白蛋白