实例透明质酸在腹膜透析中作用的机理研究.docVIP

论文实例：透明质酸在腹膜透析中作用的机理研究 作者简介：郭群英，女，1972年05月出生，1998年 09月师从于中山大学叶任高教授，于XX年07月获博士学 位。 摘要腹膜透析，特别是持续性不卧床腹膜透析 (con tin uousambulatoryperitonealdialysis, CAPD ) 是慢 性肾功能衰竭的主要治疗方法之一。超滤失败是目前导致 透析不充分乃至腹膜透析失 败的重要原因。如何预防腹膜超滤功能下降，有效地保 护持续性腹膜透析中的腹膜功能，是腹膜透析研究的热点。 目前临床尚无有效防止超滤失败的渗透压制剂或药物。透 明质酸是一种由双糖单位N -乙酰葡糖胺和葡醛酸重复连接 构成的多糖。我们以前的研究发现，在急性大鼠腹膜透析模 型中应用透明质酸可以有效地增加超滤量，增加尿素氮的 清除率，减少蛋白质丢失，而且这种作用与其分子量和其在 透析液中的浓度密切相关。透明质酸的作用机理目前还不 清楚。有研究表明，腹膜表面可能存在一层由腹膜间皮细 胞分泌的透明质酸、磷脂所形成的表面活性层，而且这一 层可能在腹膜转运，特别是腹膜水转运中起很重要的作用。 通过振动腹腔来破坏这一液体层可增高腹膜的通透性。我 们推测，长期腹透过程中，腹透液的冲刷可使这一表面活性 层结构破坏，腹膜失去其表面这一极为重要的疏水层后功 能发生改变，对水通透性增加，腹腔液体重吸收增加，从 而导致超滤功能下降。透析液中加入的大分子量透明质酸 (外源性透明质酸)在腹腔静水压作用下，与内源性透明 质酸层一起在腹膜表面形成一层保护膜(restrictf iltercake),保护其免受非生理性腹透液损害，并有降低腹 膜通透性的作用，从而减少腹腔液体吸收，增加超滤量，维 护腹膜功能。 虽然透明质酸在大鼠急性腹膜透析模型中显示了较好 的效能，但其在大鼠慢性腹膜透析中的作用、持续性应用 透明质酸后腹膜功能将如何变化尚不肯定。尽管国际腹透 界对腹膜表面活性层有种种猜测，并通过对腹膜间皮细胞 (MPCs)研究，间接证实了该层的存在，然而，至今仍未 有形态学证据。 H eldin的研究早已证实人间皮细胞(HM Cs)能合成大量 透明质酸(HA),新合成的HA在细胞外形成一环绕细胞的 胞衣结构，对细胞有保护作用。最近研究已证实哺乳动物 有三种透明质酸合成酶基因HAS-1、HA S-2、HAS-3,这三 个基因的产物透明质酸合成酶1(HAS -1)、HAS-2和HAS-3 在氨基酸序列和分子结构特征上有很大的同源性。虽然酶 学特征各有不同，这三种酶都可以在细胞膜内侧面催化透 明质酸链合成，但他们催化合成的HA链的长度却各不相同。 HAS1和HAS 2蛋白催化合成大分子量的HA, HAS-3则催化 合成较短的HA链。不同分子量的HA对细胞功能有不同的 影响。不断延长的透明质酸链伸出细胞膜外，成为细胞基 质（胞衣样结构）的骨架。哪一种透明质酸合成酶是人腹 膜间皮细胞（HPMCs ）透明质酸合成的关键酶？炎症因子、 各种腹膜透析液渗透压制剂对HPMCs透明质酸合成有什么影 响？如前所述，透明质酸的作用与其分子量相关，不同分 子量的外源性透明质酸对HPMCs内源性的透明质酸合成有 什么影响？所有这些问题均未见报道。为探讨这些国内外 尚未解决的问题，我们设计并进行了以下研究： 一.透明质酸在大鼠慢性腹膜透析模型中的作用 为了解透明质酸在大鼠慢性腹膜透析中的作用及腹膜 功能变化，进行以下研究：20只雄性SD大鼠随机分为3组。 高糖组（n=8）和透明质酸组（n二6）每天分别腹腔内注射 25ml的葡萄糖腹膜透析液或含透明质酸（分子量为X 106道 尔顿）的葡萄糖腹膜透析液，共7天;正常对照组（n =6）,不进 行腹腔注射。第8天进行4h腹膜功能实验并于不同时点留 取血和腹透液样品进行分析。结果如下： 高糖组和透明质酸组的腹腔内容积（IP V）显著低于正常 对照组（P值均）。高糖组尿素、钠、总蛋白D/P值均显著高 于其他两组（P均）；对照组、L、IL-1B、TN F-a组细胞培 养上清液透明质酸（HA）的浓度均显著高于对照组（P值 均），甘露醇组HAS-3mRNA表达较对照组减弱（P）。对照组、 高糖组、低糖组、葡聚糖组、甘露醇组细胞培养上清液H A 的浓度均显著高于对糖组HA浓度显著高于低糖组、葡聚糖 组和甘 因此与高浓度葡萄糖相比，葡聚糖虽增强HP MCsHAS- 2mR NA表达，但对HPM Cs的HAS-3mR NA无影响，提示其主 要促进大分子透明质酸的合成，因而更接近II PMCs的生理 状态。这一作用与渗透压可能无关。 不同分子量透明质酸（HA）对人腹膜间皮细胞（H PMCs）透明质酸合成酶的调节作用 分离培养的第2代人腹膜间皮细胞（HPMCs ）消化后传入 6孔培养板，将细胞