trop2调控头颈鳞癌侵袭转移及化疗敏感性的分子机制研究耳鼻咽喉学专业论文.docxVIP

lIII lIII I I II LI tl l IIII II IIl Y1 9 1 8464 原创性声明 本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究 工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢 的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不 包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我 共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。 作者签名： 系辨 日期：上鱼L年—妇_L日 学位论文版权使用授权书 本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校 有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文， 允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内 容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科 学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》， 并通过网络向社会公众提供信息服务。 作者签名： 盘望括师签名逝日期：—hL年上月j_日 本课题受以下基金资助：国家自然科学基金(项目编号 本课题受以下基金资助： 国家自然科学基金(项目编号 湖南省自然科学基金重点资助项目(项目编号：2007KS2003) 博士学位论文 博士学位论文 中文摘要 摘要 头颈鳞癌的早期转移及对化疗药物不敏感一直是影响患者疗效的 重要原因，因此寻找头颈鳞癌转移和化疗增敏有关的关键分子及其分 子机制一直是人们研究的重点和热点。本文将分章讨论一新颖分子一 肿瘤相关钙离子信号转导因子2(Trop2)对头颈鳞癌细胞转移及其 对化疗敏感性的作用及其调控的分子机制。 第一章Trop2在头颈鳞癌中的异常表达及其临床意义 目的分别在RNA水平和蛋白水平探讨头颈鳞癌组织中Trop2 的表达与肿瘤T分期、临床分期和有无淋巴结转移等临床病理学参数 的关系，并检测Trop2在头颈鳞癌细胞系中的表达水平。 方法采用荧光定量PCR方法检测53例头颈鳞癌组织、25例 癌旁组织的新鲜标本；采用免疫组织化学的方法检测87例头颈鳞癌 组织、20例癌旁组织的石蜡组织标本，分析其在头颈鳞癌组织中的 表达与临床病理学参数的关系。采用Western blot实验方法检测Trop2 在头颈鳞癌细胞系中的表达。SPSS 1 7．0统计软件对实验数据进行统 计分析。 结果 1)Trop2 mRNA在头颈鳞癌组织中相对表达量明显高于癌旁组 织中的表达量(PO．001)，Trop2 mRNA的过表达表达与头颈肿瘤 的临床分期、病理分级、淋巴结转移等因素相关(P0．001)，而与 患者年龄无关(PO．05)。 2)Trop2蛋白在头颈鳞癌组织中的表达强度明显高于癌旁粘膜 组织(P0．01)，Trop2蛋白的过表达与头颈肿瘤的临床分期、病理 分级、淋巴结转移等因素相关(PO．01)，而与患者年龄无关(PO．05)。 博士学位论文 博士学位论文 中文摘要 3)Trop2蛋白在头颈鳞癌细胞株中的表达量由高到低依次为 Tu686M4M2Hep2Tu2 12。 结论 以上结果提示检测Trop2的表达与头颈鳞癌的发生、发 展和淋巴结转移相关，为头颈鳞癌转移和化疗增敏机制的研究提供了 新的线索。 关键词 头颈鳞癌，Trop2，荧光定量PCR，免疫组织化学， Western blot 第二章构建沉默Trop2的shRNA的质粒载体和建立 Trop2．shRNA质粒稳定转染的细胞株 目的利用RNA干扰技术构建针对Trop2基因的shRNA质粒载 体Trop2．shRNA，建立稳定转染Trop2．shRNA的细胞株。 方法使用pGCsilencerTM Hl肫o／GFP删i载体构建表达 shRNA对Trop2基因的RNA干扰的质粒。采用脂质体转染法将构建 的Trop2．shRNA及对照no—targe．shRNA质粒瞬时转染高表达Trop2 的M4和Tu686细胞，通过荧光定量PCR、Westem blot及CCK-8法 检测效果。筛选出有效质粒后，应用G418筛选转染细胞，建立稳 定沉默Trop2基因的M4和Tu686细胞株。 齄田 耋口7I≮ 1)经过质粒DNA测序，pGC