副溶血性弧菌分离株毒力相关基因分布特征及脉冲场凝胶电泳分型水生生物学专业论文.docxVIP

王芳：副溶血性弧菌分离株毒力相关基因分布特征及脉冲场凝胶电泳分型副溶血性弧菌分离株毒力相关基因分布特征及脉冲场凝胶 王芳：副溶血性弧菌分离株毒力相关基因分布特征及脉冲场凝胶电泳分型 副溶血性弧菌分离株毒力相关基因分布特征及脉冲场凝胶 电泳分型 研究生：王芳 导师：焦新安教授 中文摘要 副溶血性弧菌(Vibrioparahaemolyticus)是一种革兰氏阴性嗜盐菌，是我国沿海地 区引发食源性疾病的重要病原菌，能引起散发性和地方流行性的胃肠炎暴发。副溶血性 弧菌在我国沿海地区和部分内陆地区引发食物中毒的发生规模及人群暴露规模呈明显 上升趋势，已高居微生物性食物中毒首位。致病性副溶血弧菌能够产生耐热性直接溶血 素(TDH)、TDH相关溶血素(TRH)，或两者均产生。该菌不仅通过海产品而且通 过淡水产品及其他食物进行流行传播。尽管目前该菌的致病机理还不清楚，但是一些公 认的与毒力相关的基因已被证实。且由于传统的生化分型和血清学分型不能有效的进行 同源性分析，而基于DNA结构研究的PFGE方法在微生物鉴定中具有很好的分型力、 分辨力、可重复性、可比性、灵敏性。因此本研究系统地调查了中国大陆的副溶血性弧 菌，特别是高致病性菌株毒力相关基因的分布情况，并对分离株的耐药谱特征进行分析； 同时应用脉冲场凝胶电泳技术(Pulsed-field gel electrophoresis，PFGE)对不同来源的副 溶血性弧菌分离株进行分子分型研究，以了解中国大陆副溶血性弧菌分离株的PFGE遗 传谱系分布以及菌株问的同源性，并结合毒力相关基因的结果，分析分离株的毒力特征， 以期为制定防治副溶血性弧菌导致食源性疾病策略提供预警、监测和控制依据。 研究中，首先对2008-2010年分离自上海、浙江、福建、广东、江苏的233株副溶 血性弧菌分离株进行毒力相关基因的检测，结果显示：223株分离株中，致病株(tdh十 或trh+)有118株，占总菌数的52．9％，其中tdh基因携带率为48．9％，trh携带率为4．0％； 高致病性菌株(tdh+和toxRS／new+)94株，占总菌数的42．2％；D，偶、MTase、HU．a和 VP2905在所有菌株中的概率分别为42．6％、43．0％、41．7％和43．0％。I晦床分离株中检 出高致病株和致病株的概率要显著高于食品分离株。在94株高致病株中，ory8、MTase、 HUo‘I和VP2905的阳性率分别为97．8％、97．8％、96．8％和96．8％，表明D，侣、MTase、 HU-(t和VP2905可作为高致病株的独特基因。 2 2 扬州大学硕士学位论文 对来自江苏、浙江和上海的177份人源株和139株食源株的耐药性分析显示，在7 种抗生素中，对氨苄青霉素(AM)、链霉素(SM)和卡那霉素(KM)的耐药率分别 为57％、40．5％和25．3％，而对诺氟沙星(NOR)、氯霉素(CM)、复方新诺明(SXT) 和四环素(TE)的耐药率仅分别为0．3％、0．3％、O．9％和1．6％，结果表明副溶血弧菌菌 株的耐药性不严重。177株人源株对四环素、卡那霉素和氨苄青霉素的耐药率要高于食 源株，而对链霉素、诺氟沙星、复方新诺明和氯霉素的耐药率要低于食源株。高致病株、 致病株和非致病株均对链霉素、卡那霉素和氨苄青霉素出现较高的耐药率，且对三种抗 生素耐药性程度不同。高致病株对多数治疗致病性弧菌感染的药物敏感，耐药现象不严 重；与国际上认为高致病株具有相同的耐药谱且对氨苄青霉素全部耐药不同，本研究的 高致病株对氨苄青霉素只是多数耐药，耐药率为58．4％。 对141株江苏、上海、浙江、福建和广东的副溶血性弧菌分离株进行PFGE研究， 结果显示可分型菌株数为119株，分型率为84．4％。经PFGE电泳获得108种带型，所 得的PFGE图谱分为五种遗传谱系：I、II、Ⅲ、Ⅳ和V，各谱系所含菌株比率分别为 14．3％、25．2％、15．I％、13．4％和31．9％，表明中国大陆的副溶血性弧菌分离株主要分布 在谱系II和V中。不同地区分离株的PFGE分析结果显示，扬州分离株集中在II和V， 浙江分离株集中在I中，其余地区分离株的分布相对集中，均有各自的优势谱系。不同 分离时间的PFGE分析结果显示，2006、2007、2008、2009和2010年分离株分别主要 分布在谱系Ⅳ、V、V、I和ⅡI中，各年代的分离株均有各自的主要谱系。不同源分离 株的PFGE分析结果显示，人源株主要分布在谱系Ⅱ和V，食品分离株相对集中在谱系 V。这些结果说明中国大陆副溶血性弧菌分离株的分离地区、分离时间及不同宿主源与 PFGE遗传谱系有一定的相关性。不同遗传谱系分离株对7种抗生素的耐药性分析显示， 各谱系不存在对氯霉素、复方新诺明和诺氟沙星耐药的菌株，对