雌激素受体α36假想蛋白loc147710和网膜素1调控骨代谢的机制研究内科学代谢内分泌专业论文.docxVIP

原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究 原创性声明 本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究 工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢 的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不 包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我 共同工作的同志对本研究所作的贡献均己在论文中作了明确的说明。 作者签名：亟茎呈 日期： 2殳!!年』月卫日 学位论文版权使用授权书 本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校 有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文， 允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内 容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科 学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》， 并通过网络向社会公众提供信息服务。 博士学位论文 博士学位论文 中文摘要 摘要 第一部分绝经后妇女雌激素受体-036介导1713．雌二醇的骨保护 作用 目的 雌激素受体．alpha36(ER．036)是一种膜受体，不同于 ER．a66、ER．a46矛IER．p主要介导雌激素的核效应，ER．036只能介导 雌激素的膜效应，如促分裂原活化蛋白激酶／细胞外信号调节激酶 (MAPK／ERK)信号通路的激活。本研究旨在探讨ER．036是否与 ER．嘶6一样，也参与调控骨代谢。 方法 免疫组织化学染色观察骨组织切片中ER．036的表达。3H- 胸腺嘧啶核苷(3H．TdR)掺入法检测细胞增殖。ELISA检测细胞凋 亡。磷酸对硝基苯酚法测定碱性磷酸酶(ALP)活性。放射免疫分析 法(ⅪA)测定骨钙素(OCN)含量。茜素红S染色评估成骨细胞基 质的矿化程度。Western blot检测ER一036、ER．a66、ERKl／2和 P．ERKl／2蛋白表达水平。H2DCFDA荧光探针检测活性氧簇(ROS) 水平。ER．036 shRNA和真核表达载体调控成骨细胞和破骨细胞 ER．036表达，并采用ERK和ROS抑制剂观察E2调控成骨细胞与破 骨细胞增殖、分化或凋亡的ER．036受体及受体后信号途径。荧光实 时定量PCR(QRT-PCR)检测骨组织OCN和抗酒石酸酸性磷酸酶 (T凡心)基因表达量。将154例椎间盘突出、椎管狭窄或脊椎前移 进行开窗术的患者分为绝经前组(60例)和绝经后组(94例，其中 包括骨质疏松组30例，低骨量组31例，正常骨量组33例)，用双能 量X线吸收法(DXA)测定患者骨密度(B加)，取血后用ELISA 检测血清骨形成标志物OCN和骨吸收标志物I型胶原氨基末端肽 骨细胞／破骨细胞的增殖、分化和凋亡无作用。(2)骨组织培养试验 骨细胞／破骨细胞的增殖、分化和凋亡无作用。(2)骨组织培养试验 结果：在高表达ER．a36的骨组织，10pM E2显著抑制骨形成细胞因 子OCN和骨吸收细胞因子TRAP的表达；而在低表达ER．a36的骨 组织，10pM E2对OCN和TRAP的表达无影响。(3)方差分析显示： 绝经前组骨ER．a36表达水平显著低于绝经后各组；绝经后正常骨量 组ER．a36表达水平较低骨量组和骨质疏松组高，低骨量组ER．036 表达水平较骨质疏松组高；绝经后各组骨ER．a66、ER．a46和ER．13 表达水平均低于绝经前组，绝经后各组间ER．0【66、ER．ot46和ER．p 表达水平差异无显著性。(4)相关分析显示：绝经后妇女骨ER．a36 表达水平与BMD呈正相关，与血清OCN和NTX水平呈负相关；绝 经前妇女骨ER．ot36表达水平与BMD、OCN和NTX水平无相关性； 绝经前和绝经后妇女骨ER．a66、ER．a46和ER．D表达水平与BMD、 OCN和NTX水平均无相关性。(5)动物试验结果：ICl62干预去卵 巢大鼠可增加BMD，但对体重和子宫重量无影响。 结论ER．a36在绝经后妇女骨代谢过程中发挥关键调控作用，高 Ⅱ 博士学位论文 博士学位论文 中文摘要 表达ER．036的成骨细胞／破骨细胞对E2高度敏感，ER．a36介导绝经后 低水平