鲤春病毒血症病毒和水霉菌诱导氧化应激发生的研究水产养殖专业论文.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 分类号 分类号 密级 华中农业大学硕士学位论文 鲤春病毒血症病毒和水霉菌诱导氧化应激发生的研究 Oxidative Stress induced by Spring Viraemia of Carp Virus and Saprolegniasis 研究生：黄建 学 号：2012308110007 指导教师：顾泽茂教授 袁军法副教授 专业：水产养殖 研究方向：水产动物医学 获得学位名称：农学硕士 获得学位时间：2015年6月 华中农业大学水产学院 二。一五年六月 万方数据 华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书学位论文 华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书 学位论文 否 如需保密，解密阴‘问 年 月 口 是否保密 独创性声明 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发 表或撰写过的研究成果，也不包含为获得华中农业大学或其他教育机拘的学位或证书 而使用过的材料，指导教师对此进行了审定。与我一同工作的同志对本研究所做的任 何贡献均已在论文中做了明确的说明，并表示了谢意。 研究生张竞走 Ⅱ搁：7_6心年刍月s日 学位论文使用授权书 本人完金了解华中农业大学关于保存、使用学位论文的规定，即学生必须按照学 校要求提交学位论文的印刷本和电子版本；学校有权保存提交论文的印刷版和电子版， 并提供目录检索和阅览服务，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位 论文。本人同意华中农业大学可以用不同方式在不弱媒体上发表、传播学位论文的全 部或部分内容，为存在馆际合作关系的兄弟高校用户提供文献传递和交换服务，同时 本人保留在其他媒体发表论文的权力。 注：保密学位论文(即涉及技术秘密、商业秘密或申请专利等潜在需要提交保密的论 文)在解密后适用于本授权书。 煳 名：爹炙 锄擗：印枷 签名日期：2毋岱年‘月F疆 签名日期：哆／矿‘年∥月厂。日 万方数据 鲤春病毒m 鲤春病毒m症病毒和水霉菌诱导氧化应激发生的研究 目 录 摘 要 一i Abstract ．iii 缩略语表 vi 第一章文献综述 _ ．．1 1鲤春病毒血症病毒研究进展 ．． 1 2水霉菌及水霉病研究进展 一2 3氧化应激及其研究进展 一3 4氧化应激与病毒感染 一6 5本研究的目的与意义 一8 第二章鲤春病毒血症病毒诱导氧化应激发生的研究 ．9 1材料与方法 一9 1．1实验材料 9 1．1．1细胞与病毒 一9 1．1．2实验试剂 一9 1．1．3实验仪器设备 10 1．2实验方法 11 1．2．1 MTT法测定H202毒性 11 1．2．2病毒感染 ．11 1．2．3细胞裂解样品收集 12 1．2．4细胞裂解样品蛋白浓度测定 12 1．2．5化学荧光法测定活性氧ROS水平 ．．12 1．2．6 DNPH比色法测定蛋白质羰基含量 ．13 1．2．7双抗体夹心ELISA法测定8羟基脱氧鸟苷(8一OHdG)水平 ．．14 1．2．8 TBA法测定脂质过氧化物一丙二醛含量 16 1．2．9 FRAP法测定T-AOC 17 1．2．10超氧化物歧化酶(SOD)活性测定 ．．19 1．2．11过氧化氢酶(CAT)活性测定 21 万方数据 华中农业大学2015 华中农业大学2015届硕士研究生学位论文 1．2．12谷胱甘肽过氧化物酶(Gpx)活性测定 ．．22 1．2．13还原型谷胱甘肽(GSH)含量测定 24 1．2．14实时荧光定量分析 25 1．2．14．1 细胞总I矾A的提取 26 1．2．14．2反转录 26 1．2．14．3 Real．time PCR 一27 1．2．15 H202预处理EPC细胞后的病毒感染及SVCV病毒G基因的定 量检测 ．28 1．3统计分析 28 2结果与分析 。29 2．1 MTT法测定H202毒性 29 2．2 H202刺激后EPC细胞氧化应激指标的测定 ．29 2．3 SVCV感染EPC细胞后氧化水平指标测定 30 2．4 SVCV感染EPC细胞后抗氧化水平指标测定 33 2．5 SVCV感染后EPC细胞的抗氧化酶基因的转录分析 36 2．6 SVCV感染EPC细胞后ROS／T-AOC分析 ．38 2．7 5009M H202刺激EPC细胞2h后活性氧自由基水平测定 39 2．8 H202预处理后SVCV感染G基因的定量检测 ．39 3讨{仑 ．40 第三章水霉菌感染鲤诱导氧化应激发生的研究 一44 1材料与方法 ．44 1．1实验材料 44 1．1．1实验动物 ．44 1．1．2实验主要试剂 44 1．1。3实验仪器设备 ．45 1．2实验方法 45 1．2．1患病鲤体表水霉菌丝的显微观察 ．45 1．2．