干旱胁迫下红麻MYB转录因子的克隆及表达特性分析项目立项开题报告.doc

干旱胁迫下红麻MYB转录因子的克隆及表达特性分析 1.1、立题意义及国内外的研究现状与存在问题 红麻(Hibiscus cannabinusl.)是耐旱、耐盐碱、适应性高、抗逆性强的韧皮纤维作物， 在麻纺、造纸、板材、动物饲料、可降解地膜、食用和药用等领域被广泛开发利用(方平平et al., 2009) o MYB类转录因子是一类含MYB结构域的转录因子，其命名源H禽成髓细胞瘤病毒 致癌基因同源物类(v-myb avian myeloblastosis viral oncogenehomolog, MYB),具有高度 保守的MYB DNA结合结构域是其共有的特征。动物MYB类转录凶子的DNA结合结构域通常含有 3个50?53个氨基酸的不完全重复区，对应称为之Rl、R2和R3区，每个MYB区域中一般都含 冇3个保守的色氨酸残基(其间隔18或19个氨基酸)起着疏水核心的作用，可折叠成一个螺旋 -转角-螺旋的结构，是与目标DNA的大沟结合的结构基础(Ganter and Lipsick, 1997) 与动 物MYB类转录因子对应，植物屮的MYB类转录因子可简单分成3个亚类：Rl-MYB. R2R3-MYB和 R1R2R3-MYB,其主要成员是含2个MYB结构域的MYB蛋白(Jin and Martin, 1999),此外，Dubos 等(2010)报道了在一些植物屮述存在一种结构为4R-MYB(RlR2R2Rl/2)的小亚族(Dubos ct al., 2010) o最早克隆得到的植物MYB转录因了是玉米的Cl基因(Paz-Ares et al., 1987)。随着 人们对转录调控研究的逐渐重视，获得的各植物MYB相关基因的数量迅速增加，对其功能也有 了深入的研究。打前已经从各种植物中鉴定出了丰富的MYB转录因子家族基因，如拟南芥中MYB 成员约冇130个，玉米中约冇100个(Haga et al., 2007; Kranz et al., 2000) o研究表明， 植物MYB基因家族在植物牛长发育的全过程中都起到重要的作用，其广泛参与次生代谢调控、 对逆境胁迫和激素的应答(Abe et al., 2003; Singh et al., 2002; Vannini et al., 2004), 并在细胞分化、形态建成和光信号传导等方面起重要的调控作用(Cominclli ct al., 2008; Meissner et al., 1999; Raffacle ct al., 2006;郭晋隆 et al., 2012)。 转录因了作为上游的调控因了可以调控下游多个和关功能基因的表达。实验证明，比起单 纯使用下游的某种功能基因，利用转录因子来改良作物的抗逆性，可以获得更为理想的综合效 果(陈儒钢 et al., 2010)。Dai 等(2007)将水稻 OsMYB3R-2 基因在拟南芥(Arabidopsis thaliana)中过量表达，发现转基因拟南芥提高了对干旱、盐、低温和ABA胁迫的耐受力(Dai et al., 2007)。值得指出的是，并不是所冇的MYB相关蛋白都是转录激活子，冇的也起负调控作 用，抑制目标基因的表达(Jin and Martin, 1999)。 1.2存在的问题 20世纪以来，由于生态环境的恶化，各国政府及科研机构都十分重视生态环境的修复和 植物抗逆性育种的研究，而发掘和利用植物抗逆性有利基因，培育逆境条件下能保持相对稳定 的产量和品质的新品种，是抗逆性育种的重要H标。研究和揭示干旱胁迫条件下红麻MYB基因 表达量发生的变化，可更好地了解红麻对干旱胁迫的生化应激机制，对促进红麻基础科学研究 有重要的理论意义和实际应用价值。 1.3主要研究内容 为获得红麻MYB转录因子基因序列信息及其在不同非生物因子胁迫下的农达情况，本研究 通过对红麻根茎叶的MYB转录组数据分析，采用RT-PCR方法从红麻转录本屮克隆了该基因的基 因组D\A和cDNA全长序列，并进行生物信息学分析。 1.4拟解决的关键性问题 通过比较正常供水和干旱胁迫条件下红麻叶片的MYB转录因子表达变化情况，探讨其转录 因了基因并界表达的生物学功能，揭示红麻在干旱胁迫条件下的生化应激机制，以期为进一步 研究红麻干旱适应性过程中从基因到性状表达的规律，培育耐旱、高产红麻新品种奠定基础。 2材料与方法 2.1试验材料 以福建农林人学作物遗传改良实验室筛选鉴定的耐旱红麻品种GA42为材料，播种于玻璃 温室大型陶瓷盆屮，正常栽培管理，出苗后每盆留苗20株，最后定苗10株。控水前，供试红 麻均正常等量一致供水，在红麻五叶期进行正常供水和干旱胁迫2种处理。以正常供水为对照， 干旱胁迫处理组则停止浇水，处理组于停水后第13d,分别取正常供水（对照）和干旱胁迫处 理