茶黄素对胶原引起的血小板功能的影响及其抗血栓作用研究茶学专业论文.docxVIP

浙江大学研究生学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 浙江大学研究生学位论文独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发 表或撰写过的研究成果，也不包含为获得浙婆太堂或其他教育机构的学位或证 书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中 作了明确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名：幂多等 签字日期．o Cb年-。乡月多)日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解浙江太堂有权保留并向国家有关部门或机构送 交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权浙江太堂可以将 学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩 印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。 (保密的学位论文在解密后适用本授权书) 学位论文作者签名：程诺 导师签名： 储砗 签字日期：汐／，易年口乡月≥o日 签字日期：2d6年弓月弓D日 万方数据 致谢两年半的研究生生涯即将结束，首先向我的导师一陈萍副教授表示诚挚的谢 致谢 两年半的研究生生涯即将结束，首先向我的导师一陈萍副教授表示诚挚的谢 意!感谢陈萍老师为我们提供了良好的科研和生活环境。陈萍老师工作认真，不 断进取的工作态度值得我长期学习；同时，她生活中平易近人，对学生关怀备至。 感谢陈老师对我研究生期间课题的指导，生活上的关怀与帮助，两年半的时间虽 然不长但是却留下了美好的回忆。 感谢医学院胡虎教授在研究生课题完成中的指导和帮助。感谢王岳飞教授为 我提供了一个良好的学习环境，在此深表谢意!同时，也感谢本系的童启庆教授、 梁月荣教授、龚淑英教授、何普明教授、屠幼英教授、骆耀平教授、王校常教授、 须海荣副教授、陆建良副教授、郑新强副教授、吴媛媛副教授、李博副教授、朱 晓玲老师、顾志蕾老师、徐平老师、郭昊蔚老师对我学习和生活上的关心和帮助! 感谢本实验室师姐邱培、师妹周盈、张甜在我实验、论文写作以及答辩过程 中给予的帮助!真心感谢医学院血栓与凝血实验室的周琦、岳明、胡梦娇、刘阳 阳、王帅、黄倩、陈小妍在我实验过程中给予我的建议和帮助，很荣幸能够认识 你们。感谢学习室的邵淑宏、黄虔菲、吴婧、王洁、高媛圆、张勇、张雨曦、周 继红、张靓、魏然等在平日里的帮助! 即将结束学生生涯，特别感谢我的家人这么多年来对我学业的支持以及为此 所做出的奉献! 最后，向参与本次论文评阅、答辩的各位老师致以诚挚的谢意1 2016年3月 万方数据 摘 摘 要 心血管疾病，包括中风、血栓性疾病、动脉粥样硬化等，一直以来是导致死 亡的主要原因之一，血小板在心血管疾病的发展过程中扮演着重要的角色，因此 抗血小板治疗成为预防和治疗心血管疾病的主要手段。然而目前临床使用的抗血 小板药物，如阿司匹林，存在着出血、引起胃肠道不适等副作用，寻找天然活性 来源的抗血小板物质成为预防和治疗心血管疾病研究的热点之一。红茶是世界上 消费量最大的饮料之一，流行病学研究表明饮用红茶具有预防心血管疾病的作 用，其临床研究结果多集中在降血脂，改善血液循环等领域，在对血小板活性的 影响方面较少涉及。茶黄素作为红茶的特征品质成分，具有抗氧化、抗炎、抗癌 等多种生物活性，在心血管健康方面也表现出保护作用。然而，显少有针对茶黄 素单体在血小板活性影响以及抗血栓作用方面的研究，尤其在其作用机理的深入 探讨方面研究甚少。 本研究探索了红茶主要活性成分茶黄素对胶原引起血小板活性的影响以及 其抗血栓作用。以茶黄素为研究对象，将从人体血液中分离出来洗涤血小板，建 立不同的研究体系，利用血小板聚集仪、流式细胞仪、血栓素A2试剂盒、免疫 印迹等技术进行系统性的分析，并结合体内实验，利用C57小鼠研究茶黄素的 止血功能和对体内血栓形成的影响。 研究结果表明，茶黄素可以明显抑制由胶原、ADP、U46619等多种刺激剂引 起的人体血小板聚集，且呈现出剂量依赖效应。利用流式细胞仪进行单个血小板 激活检测时发现，茶黄素对蛇毒引起的P．选择素表达和纤维蛋白原的结合有明 显的抑制作用。茶黄素可以抑制血小板在纤维蛋白原上的铺展，由此证明了茶黄 素对血小板从外到内的信号通路的抑制活性。免疫印迹实验表明，茶黄素抑制胶 原引起的血小板内脾酪酸激酶(Syk)的磷酸化，由此推测，Syk是茶黄素抑制 胶原引起的血小板活性的一个重要的作用靶点。通过应用Syk的抑制剂白杉醇 (Piceatann01)进行对比和叠加实验，进一步证明了茶黄素对血小板的作用靶点 是Syk，同时，Syk下游两个蛋白PLC／2和Akt的磷酸化受到相应抑制，也在本 实验中得以验证。小鼠体内活性研究中，利用断尾技术研究茶黄素的止血活性， II 万