稻纵卷叶螟信息素结合蛋白的免疫定位及结合特性分析农业昆虫与害虫防治专业论文.docxVIP

分类号 分类号 密级 华中农业大学硕士学位论文 稻纵卷叶螟信息素结合蛋白的免疫定位及结合特性分析 Immunolocalization and Ligand-binding characterization of Pheromone Binding Proteins from Cnaphalocrocis medinalis 研究生： 赵振菲 学 号： 2012301110211 指导教师： 王满困教授 指导小组： 王满困教授 王永模副教授 吴刚副教授 专业：农业昆虫与害虫防治 研究方向：昆虫化学生态学 获得学位名称：农学硕士 获得学位时间：2015年6月 华中农业大学植物科学技术学院 二0一五年六月 万方数据 华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书 华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书 嘲缈 学使论文 是否保密 否 如需保密，解密时间 年 月 日 独创性声明 本人声磷所呈交的论文是我个人在导疖指导下避行的研究工律及取得的研究箴 秉．尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其德人已经发 表我撰写连曲研究成果，也不包舍为获得华中农业大学或其他教育机构盼学位或证书 雨使用过的材料，指导教好对此进行了审定．与我一同工作的同志对本研究新傲的任 何耍献均已在论文中敛了胡确的说晴，并表示了谢意． 研牲鲐拂雄 帆瑚年印羔爵 学位论文使用授权书 本人完奎了解华中农韭大学关予保存、使用学位论文的规定。印学垒必绠接照学 校要求提交学位论文的印剧本和电子版率；学校有权保存提交论文的印蒯版和电子版， 并提供茸录检索和阅览瓤务，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位 论文．本人屁意华中农业大学可l；c用不疑方式在不蜀媒体土发表。传播学位论文的全 部或部分内容，为存在馆际合作关系的兄弟高校用户提供文献传递和交换展务，箍对 本人保管在其他媒体发表论文的权力． 菠：保密学位论文(率涉及技术秘密、商业秘密或申请专．i同等潜在譬要受交锫密曲论 文)在解密后适用子本授权书。 学位论文作者擞：匙擗导师签名：摊I 签名譬期：劲阱‘月与日 签名日期：占守，s年易努e丑 注：请梅本袭矗接装订。饪学位论文的扉页和目蒙之弼 万方数据 稻纵卷叶螟信息素结合蛋白免疫定位及结合特性分析目录 稻纵卷叶螟信息素结合蛋白免疫定位及结合特性分析 目录 摘要 i Abstract ．．． ．． ． ． ． ． ．．．．．．．．iii 缩略语表 v 第一章文献综述 ．1 1．1稻纵卷叶螟研究概况 1 1．2昆虫的嗅觉行为 4 1．3气味结合蛋白研究进展 ．7 1。3。1气味结合蛋白的种类、特征和分布 ．7 1．3．2昆虫气味结合蛋白的功能研究 ．．8 1．4研究目的和意义 。10 第二章稻纵卷叶螟性CmedPBP4的大量表达与纯化 12 2．1材料与方法 ．．12 2．1．1主要菌株、试剂及试剂盒 12 2．1．2主要仪器 ．12 2．1．3质粒的提取 13 2．1．4构建原核表达载体 14 2．1．5目的蛋白的小量试表达 15 2．1．6 SDS一聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE) 。15 2．1．7目的蛋白的大量表达 15 2．1．8包涵体蛋白的变性和复性 16 2．1．9目的蛋白的纯化 16 2．1．10蛋白浓度的测定 。16 2．2结果与分析 ．．17 2．2．1目的蛋白的表达 17 2．2．2 pET-22b(+1一CmedPBP4蛋白的纯化 l 7 2．3讨论 19 第三章稻纵卷叶螟CmedPBP4的免疫印迹反应和免疫定位 20 3．1材料与方法 ．．20 3．1．1抗体制备 20 3．1．2供体昆虫 ．20 3．1．3主要试剂及试剂盒 21 万方数据 华中农业大学2015届硕士研究生学位(毕业)论文3．1．4主要仪器 华中农业大学2015届硕士研究生学位(毕业)论文 3．1．4主要仪器 21 3．1．5组织总蛋白提取 21 3．1．6蛋白免疫印迹反应(WesternBlot) 一22 3．1．7扫描电子显微镜观察 22 3．1．8透射电子显微镜观察 22 3．2结果与分析 一23 3．2．1蛋白免疫印迹反应 ．23 3．2．2免疫组织化学定位 24 3．3讨论 一25 第四章稻纵卷叶螟CmedPBP4的结合特性分析 。26 4．1材料与方法 一26 4．1．1实验试剂的准备 26 4．1．2荧光结合化学物质 ．26 4．1．3主要仪器 27 4．1．4荧光探针适合性测定 27 4．1．5荧光竞争结合试验 28 4．1．6数据分析 28 4．2结果与分析 ．．29 4．2．1荧光探针适合性检验 29 4．2．2气味分子与CmedPBP4的结合能力 一29 4．3讨{仓 3 l 第五章结论与展望 34 5．1结论 34 5．2展望