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黑体二号居中，行间 距21磅,段前后间距 12、 18 磅 第一章前言 1.1发展生化“下游”技术的意义 “第一?章”与“前言”及“前”与“言Z间均加两个空格，根据人标 题字数多少适当调整 现代生物技术的迅猛发展使当今世界发生了日新月异的变化。迄今为止，人们 已经能够设计、制造、生产多种具有重要价值的蛋白质，如胰岛素(insulin)、 白细胞介素(interleukin)、干扰素(in [cron)、促红细胞生长素(EPO)和 肿瘤坏死因子(TNF)等。 1.2,基因工程蛋白质分离纯化的原则 加 空 格 正文部分：宋体小四，行 间距21磅，段前后间距 为0 必须考虑到产品的变性和活性恢复等问题。如 不同技术来改进分离工艺。…般认为，要实现 高纯度和低成本必须做到以下几点： 生物产品有许多使生物高分子， 果选取的条件合适，也可以通过 基因工程蛋口质分离纯化的高效率、 使用温和、高效的方法； 尽可能地减少操作步骤； 减少化学和生化试剂地使用。 Prokopakis等提出了优化分离纯化步骤的基本规则，用以指导分离纯化操作 标题另起一行居右，黑体 四号,行距21磅,段前后 间距均为12磅 的改进。具体规则如下: 选择分离操作必须基于产品的物理化学性质和生化性质; 高产量的杂蛋白必须要除去； 最高效率地利用ri标产物与杂质间地理化性质差异； 尽可能地将高效的步骤放在前而； 把操作最困难的步骤放在最后山2]。 /体 Times new roman? 小四，右上角标 1.3现有白细胞介素一13的分离纯化方法 1993年，Mckcnzic首次提出白细胞介素一 13 (IL-13)的名字，此后，人们 逐渐发现了 IL-13的许多生物学活性：刺激前髓样细胞(TF—1)的增殖，直接诱 导原始造血前体细胞(LinSca-l4)的增殖及分化；…… 第二章实验材料与方法 2. 1概述 本论文主要从IL-13地分离纯化入手，将传统的细胞破碎和双水相萃取（选 择PEG盐系统）用于IL-13的提纯。 2. 2.实验材料与方法 标题另起一行，黑体小四号，行 距21磅，段前后间距均为 标题另起一行，黑体小四号，行 距21磅，段前后间距均为6磅 标题前空两格“221” Z厉加一 空格，下同 ②操作方法 按事先计算，取-定量的PEG母液、盐母液核细胞碎片固体（超声波破碎, 4000r/min离心收集），用NaOH或盐酸调节pH值，加水至要求的浓度； (2-1)用公式编辑器,单倍行距, 居中居右 (2-1) 用公式编辑器,单倍行距, 居中 居右 第三章实验结果与讨论 3. 1 GST-IL-13 的培养 3.2 GST-IL-13总含量的测定 3. 3化学破碎 3.3.1 pH的影响 pH对蛋白质禅放的影响见图3.8。pH的作用主要是影响蛋白质的电离平衡，从 而影响到其融解性。JM109菌的细胞壁蛋口在微碱性师的融解性较高，同时这又很 接近细胞本身的生长环境，故蛋白质不会发生结构上的改变。从图小也可以知道， pH以8.0左右为宜。 鞍、硫酸镁、硫酸钠、磷酸钠）构成的双水和体系，系统分析了蛋白质、GST-IL —13和细胞碎片的分布规律。 表3.4平均相对分了质录对双水相萃取结果的比较 表编号后空?格 五号宋体居中，段前、后 间距分别为0磅、6磅 相组成 A B C D 蛋口收率/% 64.3 69.5 68.7 41.2 GST-1L-13/% 51 78.4 71.5 19 成相情况 上清、下微浊 戛卜?清 上清、下浊 上下相浑浊 上下两根线粗3/2磅,中间 一根1/2磅 A.PEG600(26%),硫酸钗(14%)； B.PEG 1540(25 硫酸馁（1 爲z C.PEG600(25 %)，硫酸钱(8 %)； D.PEG1540(20%),硫酸钱(10%)； 表后空一行 五号或更小字体；说明性文字在表下方，宋体五号 第四章结论与展望 4. 1结论 ⑴通过正交实验设计，对化学渗透法破碎JM109菌的齐影响因素进行了实验 研究和显著性分析，确定了齐影响因素显著性的大小，并对齐显著因子进行了单独 实验，确定处适宜的破碎条件为盐酸弧7.0mol/L,Triton X-100 0.5%, pH为8.0。 ⑵综合比较了超声波细胞…… 4. 2对进一步研究的展望 本实验对基因工程菌JM109屮以包涵体形式存在的外源融合蛋白GST-IL- 13进行了细胞破碎（超声波法、化学渗透法）、包涵体融解、双水相萃取等方而 的实验研究，确定了最佳的细胞破碎、双水相萃取的工艺路线和工艺条件，并取得 较为满意的结果，为下一步的研究工作奠定了良好基础。进一步的研究工作主要包 括： ⑴口标产物GST-IL-13的进一步纯化。 ⑵口标产物GST-IL-13的酶切和折叠复性实验，尽可能地提高酶切