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浙江工业大学2∞8硕士研究生论文符号与缩略语 浙江工业大学2∞8硕士研究生论文 符号与缩略语 L—Asp(L-Aspartic acid) L天(门)冬氨酸 p-烈a(p-Alanine) B．丙氨酸 HPLC(high pI。r：f0如啪ce liquid chromatography) 高效液相色谱 PCR(polymerase chain reaction) 聚合酶链式反应 UV(ultraviolet specuum) 紫外光谱 SDS(1auryl sulfate) 十二烷基磺酸钠 Amp(ampicillin) 氨苄青霉素 Kan(kanamycin) 卡那霉素 Tris(tris-hydroxymethyl-aminomethane) 三(羟甲基)胺基甲烷 EDTA(ethylenediaminetetmacetic acid) 乙二胺四乙酸 TE Tris．EDTA缓冲液 CTAB(Cetyltrimethyl Ammonium Bromide) 溴化十六烷三甲基铵 TAE Tris．乙酸缓冲液 IPTG(isopropyl—p-D-thiogalactopyranoside) 异丙基硫代．B．D．半乳糖苷 X—gal(5-bromo-4-chlom-3-indolyl-p-D-galactopyranoside) 5．溴4氯一3一吲哚-肛D-半 乳糖苷 d(day) 天 h(hour) 小时 min(minute) 分钟 s(seeond) 秒 r／rain 转速 浙江工业大学学位论文原创性声明 浙江工业大学 学位论文原创性声明 本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行 研究工作所取得的研究成果。除文中已经加以标注引用的内容外，本论文 不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得浙江 工业大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出 重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人承担本声明的 法律责任。 作者签名：至长豫羔 日期．。洚臼／日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意 学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文 被查阅和借阅。本人授权浙江工业大学可以将本学位论文的全部或部分内 容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存 和汇编本学位论文。 本学位论文属于 l、保密口，在 年解密后适用本授权书。 2、不保密口。 (请在以上相应方框内打“√) 誓篙2：慰。裂篆6引昌 翩摊。参石舀聃：年川日 浙江工业大学2008硕士研究生论文钝齿棒杆菌L．天冬氨酸0【．脱羧酶基因的克隆与表达 浙江工业大学2008硕士研究生论文 钝齿棒杆菌L．天冬氨酸0【．脱羧酶基因的克隆与表达 摘要 本文建立了一种快速有效的泛酸及泛解酸在转化液中的HPLC检 测方法。其最优条件为：采用色谱柱Agilent Zorbax SB—Aq柱(59in， 4．6x250mm)；流动相为0．02mol／L KI-12P04-乙腈(V：V-9：1)pH5．5； 流速：1．0mL／min；柱温：30℃；检测波长200rim，参比波长600rim； 进样量：20此。 该条件下，泛酸和泛解酸的保留时间标准偏差分别为0．027％、 0．040％，峰面积标准偏差分别为0．29％、O．19％。方法的线性范围试验 显示：泛酸的线性方程y=125393．43x+14429．43，相关系数R2=0．9988， 线性范围为O．1009／L一2．0009／L；泛解酸的线性方程y=l 197．97x一113．86， 相关系数R2卸．9992，线性范围O．1009／L一5．0009／L。泛酸回收率为 87．22％~111．80％；泛解酸回收率为102．25‰91．32％。 钝齿棒杆菌(C crenatum)中编码L．天冬氨酸0【．脱羧酶的基因panD 被克隆，并连接到质粒pEKEx2上构建了表达载体pEKEx2-panD，随 后电击转化到该菌中，通过抗性平板筛选出重组质粒。提取重组质粒 酶切鉴定发现有外源片段的插入。测序结果显示C crenatum的panD 序列与NCBI Gene Bank中的同属菌谷氨酸棒杆菌(C glutqmicum)序 列有99％的同源率，软件预测的蛋白质序列则与其完全吻合。panD序 4 浙江工业大学2008硕士研究生论文列在C 浙江工业大学2008硕士研究生论文 列在C crenatum与C glutamicum间高度保守。其中优化了C cre