镁通过调节钙化相关因子的表达抑制血管钙化内科学专业论文.docxVIP

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镁通过调节钙化相关因子的表达抑制血管钙化内科学专业论文

优秀毕业论文 精品参考文献资料 河北医科大学 河北医科大学 学位论文使用授权及知识产权归属承诺 本学位论文在导师(或指导小组)的指导下,由本人独立完成。 本学位论文研究所获得的研究成果,其知识产权归河北医科大学所 有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表 与学位论文主要内容相关的论文,第一署名为单位河北医科大学,试 验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。 学院领导盖章: ‘驯芎4、年≥月弭日 河北医科大学研究生学位论文独创性声明 本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果,除了 文中特别加以标注和致谢等内容外,文中不包含其他人已经发表或撰 写的研究成果,指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写, 文责自负。 研究生签名:轩晶晶 导师签 p侈年弓月;)日 万方数据 目 目 录 中文摘要 l 英文摘要 4 英文缩写 8 研究论文镁通过调节钙化相关因子的表达抑制血管钙化 —1L—JL 刖吾 9 材料与方法 11 结果 19 附图 21 附表 25 讨论 26 结论 29 参考文献 30 综述 镁在慢性肾脏病血管钙化中的作用 .32 致谢 41 个人简历 42 万方数据 中文摘要镁通过调节钙化相关因子的表达抑制血管钙化 中文摘要 镁通过调节钙化相关因子的表达抑制血管钙化 摘 要 目的:血管钙化是慢性肾脏病(CKD)患者的常见并发症,与心血 管疾病(CVD)死亡率密切相关。众所周知除传统危险因素,非传统因 素,如尿毒症毒素、矿物质代谢紊乱,尤其是高磷血症,在血管钙化的发 生发展中起着重要的作用。其中高磷可通过很多途径诱导血管平滑肌细胞 (VSMCs)发生钙化,如血管平滑肌细胞凋亡、骨源性分化、钙化促进 因子(如:核心结合因子0【.1)及抑制因子(如:基质G蛋白;骨桥蛋白质) 的平衡紊乱等。因此由于血管钙化发生的机制十分复杂,致使目前对血管 钙化尚无有效的预防和治疗方法。镁离子作为体内重要的阳离子对维持血 管弹性和心脏节律有重要的作用,因此近年来镁离子与血管钙化之间的关 系备受关注,有临床研究发现碳酸镁可能会抑制冠状动脉钙化的进展,但 镁离子和血管钙化之间的确切关系目前尚不完全明确,因此本研究旨在探 讨增加镁离子浓度后对高磷诱导血管钙化的影响及其可能的机制。 方法: 1 VSMCs原代培养 取5周龄雄性健康SD大鼠胸主动脉通过组织贴壁法进行VSMCs原 代培养,应用形态学和免疫学方法进行平滑肌细胞鉴定。 2实验干预及分组 随机将VSMCs分为4组:(1)正常对照组:加入10%胎牛血清的低 糖DMEM培养基;(2)高磷组:正常培基中加入10 mmol/L B一甘油磷酸 (p.GP);(3)镁干预组:在高磷培基中加入3 mmol/L硫酸镁(MgS04); (4)镁通道抑制剂(2.APB)干预组:高磷培基中加入3 mmol/L MgS04 及10~mol/L 2-APB。各组VSMCs分别培养0、3、6、10、14天。 3在培养14天后测定各组VSMCs的钙化水平 各组VSMCs的钙化染色应用茜素红(Alizarin red stain)方法;各组 VSMCs钙含量测定应用邻甲酚酞络合酮比色法。 4在培养14天后测定各组VSMCs的碱性磷酸酶(ALP)活性 将各组VSMCs培养14天后弃去其上清液,依据ALP活性试剂盒测 万方数据 中文摘要 中文摘要 定ALP活性,此过程严格按照试剂盒说明书进行操作。 5在不同时间点测定各组VsMCs核心结合因子0【.1(Cbfal)mRNA 的表达 应用逆转录PCR分别检测0天、3天、6天、10天、14天时正常对 照组、高磷组、镁干预组以及14天时镁通道抑制剂干预组Cbfal mRNA 的表达。 6在不同时间点分别检测各组VSMCs中基质G蛋白(MGP)mRNA 和骨桥蛋白质(OPN)mRNA的表达。 应用RT-PCR分别检测0天、3天、6天、10天、14天时正常对照组、 高磷组、镁干预组以及14天时镁通道抑制剂干预组VSMCs MGP mRNA 和0PNmRNA的表达。 7统计学处理 应用SPSSl9.0软件进行数据统计学分析,实验数据应用均数±标准 差表示,多组问均数差异比较应用单因素方差分析(ANOVA),组间均数 两两比较应用SNK检验,P0.05认为差异有统计学意义。 结果: 1大鼠VSMCs的原代培养 大鼠原代VSMCs采用组织块贴壁法获得,一般情况下动脉组织块贴 壁后约3~4天即可爬出少量细胞,细胞形状主要为长梭形,并以束状形 式排列,组织块贴壁6—7天后细胞融合成片,细胞形状仍以梭形为主。当 细胞处于亚融合状态时即可传代,传代后的细胞开始为椭圆形或者圆形, 待细胞贴壁后可逐渐伸展为梭形,细胞浆丰富,细胞核呈圆形或者卵圆

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