副猪嗜血杆菌的分离鉴定及诊断方法与灭活疫苗的研究预防兽医学专业论文.docxVIP

毕中农业大学博士学位论文方法最低可检测出l：2¨倍稀释的高免血清，具有良好的敏感性。按本方法制备的 毕中农业大学博士学位论文 方法最低可检测出l：2¨倍稀释的高免血清，具有良好的敏感性。按本方法制备的 间接血凝诊断试剂保存期可达6个月。本研究为副猪嗜血杆菌抗体的检测提供了一 种简捷、灵敏和特异的方法。采用该间接血凝试验检测方法从2005年3月到2005 年12月对全国七个省份芡血清1665份的抽检结果阳性784份，阴性881份，阳性 率47．1％，从抗体方面表明副猪嗜血杆菌病在我国各地流行较普遍。 4．副猪嗜血杆菌病灭活疫苗的研究 4．1副猪嗜血杆菌病灭活疫苗制备与检验用菌株的筛选 根据本室完成的副猪嗜血杆菌流行病学调查结果，以我国最流行的血清4型和5 型菌株研制疫苗，通过对临床资料及动物试验结果的比较筛选出毒力较强，免疫原 性较好的菌株即血清4型MD0322抹和血清5型SH0165株作为疫苗候选菌株，毒 力稳定性和免疫原性稳定性试验结果表明两株菌种连传25代后仍保持稳定，因而最 终确定这两株细菌作为副猪嗜血杆菌病灭活疫苗制备与检验用菌株。 4．2副猪嗜血杆菌病灭活疫苗基础菌种的研究 按照《中国兽用生物制品质量标准》要求建立用于副猪嗜血杆菌病灭活疫苗制 备与检验用菌株的基础种子，对基础菌种的形态、培养特性、生化特征、血清型、 毒力、免疫原性、毒力稳定性和免疫原性稳定性等进行研究。结果表明基础菌种在 方面均符合副猪嗜血杆菌的特征，MD0322株为血清4型，SH0165株为血清5型， 基础菌种纯粹检验无杂菌生长，两株菌种连代25代以后的毒力和免疫原性均保持稳 定不变，在各方面完全符合基础菌种的要求。 4．3副猪嗜血杆菌病灭活疫苗安全性试验 在实验室试制五批副猪嗜血杆菌病灭活疫苗，批号依次为0301、0302，0303， 0304、0305。通过对最小使用日龄靶动物接种、对靶动物各种接种途径一次单剂量 接种，对靶动物单剂量重复接种，对靶动物一次超剂量接种以及对怀孕动物(妊娠 母猪)接种后观察其精神状态，体温和食欲等指标对疫苗的安全性进行了评价，结 果表明该疫苗用于猪的免疫是安全的，无副作用。 4．4四种副猪嗜血杆菌病灭活疫苗对仔猪免疫效力的比较 用副猪嗜血杆菌MD0322株和SH0165株两株菌种分别制各副猪嗜血杆菌病单 价灭活疫苗．将两种单价灭活疫苗与本室试制的副猪嗜血杆菌病灭活疫苗(双价)， 以及国外生产的两种副猪嗜血杆菌病灭活疫苗相比较，每种灭活疫苗分别免疫28—35 日龄仔猪IO头，21日后二免，同时设立lO头未免疫对照f‘免后14日，分别用血 清4型和5型标准菌株经腹腔内攻毒，结果两种单价疫苗的保护率均为4／5，本室试 制的副猪嗜血杆菌病灭活疫苗总的保护率为9／10，两种进口疫苗的总保护率分别为 8／10(疫苗含血清4型和5型菌)和5／10(疫苗含血清2型和6型菌)。 4．5副猪嗜血杆菌病灭活疫苗效力试验 通过动物试验对试制的五批副猪嗜血杆菌病灭活疫苗进行效力枪验。每批选 6 副猪嗜血杆菌的分离攀定及灭活疫苗的研究择28～35日龄断奶仔猪20头，每批疫苗免疫10头猪，另外lO头作为对照。在 副猪嗜血杆菌的分离攀定及灭活疫苗的研究 择28～35日龄断奶仔猪20头，每批疫苗免疫10头猪，另外lO头作为对照。在 二免后14日分别用MD0322株和SH0165株通过腹腔内攻毒，结果免疫猪保护率 均在4／5以上，对照组发病率均在3／5以上，表明试制的副猪嗜血杆菌病灭活疫 苗具有良好的免疫效果。 4．6副猪嗜血杆菌病灭活疫苗的免疫期及抗体消长规律测定 用本室试制的五批灭活疫苗对其免疫期和免疫猪的抗体消长规律进行研究。五 批疫苗按常规免疫剂量分别对母猪和14日龄仔猪免疫，于免疫后7、14、28、60、 90、120、150、180、210日采血测定抗体。结果在疫苗免疫后2周开始检测出抗体， 以后抗体效价逐渐上升，60--,120日处于高峰，以后逐渐下降，持续至免疫后180日。 母猪免疫后的抗体消长规律与仔猪的抗体消长规律基本一致，但抗体效价高于仔猪。 表明副猪嗜血杆菌病灭活疫苗加强免疫后的免疫期可达6个月。 4．7副猪嗜血杆菌母源抗体与仔猪免疫的相关性 将试验仔猪分成4组，每组lO头。第l组仔猪为未免疫母猪所产，并且仔猪未 免疫；第2组仔猪为未免疫母猪所产，但仔猪实行免疫；第3组仔猪为免疫母猪所 产，但仔猪未免疫；第4组仔猪为免疫母猪所产的仔猪，并且仔猪实行免疫。分别 在仔猪出生后第2、7、14、21、28、35、42和48日采血用『B】接血凝试验和琼脂扩 散试验测定血清抗体效价。通过对抗体检测结果的比较发现母源抗体水平在免疫母 猪所产仔猪显著高于非免疫组母猪所产仔猪。另一方面，免疫母猪和非免疫母猪所 产仔猪在免疫后所激发的抗体水平没