磁性高分子微球的制备及对质粒dna的分离纯化生物化工专业论文.docxVIP

中文摘要采用磁性高分子微球进行生物活性物质的分离的技术，是一种高效集成化技 中文摘要 采用磁性高分子微球进行生物活性物质的分离的技术，是一种高效集成化技 术，这种技术是未来生物分离技术发展的方向。本文旨在制备一种具有超顺磁性 的交联度较高的的单分散磁性高分子微球，并将其应用于蛋白质、质粒等生物大 分子的分离纯化。 本文以甲基丙烯酸缩水甘油酯(GMA)为单体，二乙烯苯(DVB)为交联 剂，采用分散聚合法结合渗透法制备了交联度为3．5％，粒径为1-1．59m的刚性 单分散高分子微球，并成功引入高密度氨基基团；用PSA、ESEM、VSM，IR 等分析手段对磁性高分子微球的相应性能进行了表征，结果显示制备的微球粒径 均一，形态完整，表面光滑无孔，具有超顺磁性，比饱和磁化强度为16．48emu／g， 氨基修饰密度为4．432mmol／g dry resin。 为了检验微球的实际应用效果，利用制备的磁性微球对质粒DNA进行了分 离纯化。微球的吸附过程快，1rain便可达到平衡；在pH 6．5、盐浓度0．5mol／L 的吸附条件下，最高吸附量可以达到90．3599／mg dry resin：在pH 9、盐浓度 1．25mol／L、洗脱体积400uL的条件下，核酸的洗脱回收率达到97．2％；同时微 球在重复利用时表现出了很高的操作稳定性，也具有良好的化学稳定性。微球对 质粒DNA的纯化效果良好。应用其直接对细胞的碱裂解液进行吸附，1．5mL菌 液中可分别回收19．4 p g和24．8弘g(加入RNA酶)质粒。结果表明该磁性微球 可以快速简便的纯化质粒DNA。 为了获得更小的粒径，本文又选用无皂乳液聚合法结合溶胀法成功合成了交 联度为2—5．5％的200-600nm的窄分散微球，比饱和磁化强度为10．99emu／g。 关键词：磁性高分子微球；分散聚合法；渗透法；质粒纯化；无皂乳液聚合法； 溶胀法： AB AB STRACT In this article，magnetic polymer microspheres with polyglycidyl methacrylate (PGMA)CROSS-linked by divinylbenzene(DVB)are fabricated by dispersion polymerization and penetration—deposition method．The morphology,size and magnetic characteristics of the microspheres were extensively characterized．The M-PGMA microspheres were nonporous，of smooth surface and superparamagnetic with a saturation magnetization of 1 6．48 emu／g． Recycled of the latter material for plasmid purification exhibited stability of the M-PGMA，The chemical stability was also confirmed by examining its plasmid adsorption after incubation in various solutions such as 0．I mol／L NaOH for 24 h．The adsorption capacity of plasmid DNA reached 90．35I．tg／mg dry resin when pH is 6．5 and salt concentration is O．5mol／L and the elution yield 97．2％when pH 9 and salt concentration 1．25 mol／L．The magnetic beads ale effective at binding DNA from a crude cell lysate．The plasmid is isolated from 1．5ml cell culture，following alkaline lysis yielding 1 9．4lag and 24．8Itg(with ribonuclease A)．The results presented in this article show that M-PGMA beads suitable for isolation and purification plasmid DNA． In order to gain