倒刺鲃雄激素受体cdna克隆序列分析及时空表达水生生物学专业论文.docxVIP

倒刺鱼巴雄激素受体eDNA克隆、序列分析及时空表达专业：水生生物学 倒刺鱼巴雄激素受体eDNA克隆、序列分析及时空表达 专业：水生生物学 硕士生：苏华丽 导师：刘晓春副教授 摘要 雄激素(androgens)在脊椎动物性别分化、性腺成熟和生殖行为中扮演着 重要角色，而雄激素的作用是通过雄激素受体介导的。本论文克隆了倒刺鳃 (Spinibarbus denticulatus)雄激素受体(androgen receptor，AR)的全长cDNA， 分析了其序列特征，比较了氨基酸序列同源性，并研究了AR的时空表达情况。 从倒刺岱巴精巢克隆得到的AR cDNA全长3172 bp，可读编码框为2595 bp，编码 865个氨基酸，预计分子量为95．4kDa，理论等电点(p，)为7．13。倒刺鲤AR 基因存在高度可变的转录激活结构域(TAD)、高度保守的DNA结合结构域 (DBD)和中度保守的配体结合结构域(LBD)，与其他硬骨鱼类相比，三种结 构域的同源相似性分别为：TAD，12～83％；DBD，73～99％：LBD，65～98％。 将倒刺鲤AR的氨基酸序列与其它动物进行同源性比较，并构建进化树，结果显 示，倒刺宿巴AR与鲤科鱼类中的金鱼(Carassius auratus)同源性最高，其次是 黑头软口鲦(Pimephalespromelas)和斑马鱼(Danio rerio)。组织分布结果表明： AR在雄鱼脑各分区均有表达，外周组织以精巢、肝、脾、肾、头肾、心脏、红 肌、白肌和胃的表达水平最高，在皮肤、鳃和脂肪组织也有微量表达；AR在雌 鱼的嗅球、端脑、下丘和垂体中有表达，外周组织以肝脏和心脏的表达水平最高， 在脾、肾、头。肾、红肌和皮肤中有微量表达。运用RT-PCR技术研究AR mRNA 在倒刺岱巴胚胎发育过程的表达情况，结果显示：AR在受精卵、16细胞期、囊胚 中期都有微弱的表达；原肠中期和神经胚期没有表达；表达水平在胚孔封闭期、 眼囊期和尾芽期逐渐升高；肌肉效应期表达水平降低，晶体出现期升高，心跳期 降低；孵化前期、初孵仔鱼和孵化后4天(4DPH)仔鱼AR的表达水平呈现逐 渐升高的趋势。采用组织学方法鉴定脑、垂体、肝和性腺样品所处的性腺发育阶 段，然后利用Reakime．PCR技术定量检测脑、垂体、肝、性腺四种组织的AR 段，然后利用Reakime．PCR技术定量检测脑、垂体、肝、性腺四种组织的AR 在倒刺钯性腺发育早期、性腺发育中期和性腺成熟期的表达水平，结果显示：对 于雄鱼，精巢发育早期、中期和成熟期，脑组织AR的相对表达水平存在显著性 差异；精巢发育早期和中期，垂体组织AR的相对表达水平显著低于精巢成熟期， 早期和中期AR的相对表达水平差异不显著；精巢发育中期和成熟期，精巢组织 AR的相对表达水平显著低于精巢发育早期，中期和成熟期AR的相对表达水平 差异不显著。精巢发育早期、中期和成熟期，肝脏组织AR的相对表达水平存在 显著性差异。对于雌鱼，卵巢发育早期，脑组织AR的的相对表达水平显著低于 中期，早期和成熟期AR的相对表达水平差异不显著，中期和成熟期AR的相对 表达水平差异也不显著；垂体、卵巢和肝脏组织AR在卵巢发育早期、中期和成 熟期的相对表达水平的差异都不显著。结果暗示了雄激素可以通过AR的调节作 用，调节倒刺鲍脑和垂体发育成熟及功能的维持，同时也表明了AR在促进精子 发生和精子形成、卵黄蛋白原的合成、卵母细胞发育成熟过程中的重要作用。 关键词：倒刺鳃雄激素受体(AR)cDNA克隆组织分布表达水平 Molecular Molecular cloning，characterization and Spatial-Temporal expression of androgen receptor in Spinibarbus denticulatus Major：Hydrobiology Name：Su Huali Supervisor：Associate Professor Liu Xiaochun，Ph．D ABSTRACT Androgens play key roles in vertebrate sex differentiation，gonadal maturation and reproductive behaviour and their actions are generally mediated through androgen receptors． The present study described the isolation，sequencing and characterization of cDNA encoding the androgen receptor(AR)，the dist