表没食子儿茶素没食子酸酯对全身性炎症反应早期多形核白细胞脏器浸润影响的研究急诊医学专业论文.docxVIP

浙 浙 江 大 学 硕 士 学 位 论 文 木 素 复 染 镜 检 ， 拍 照 。 4 . W o st er n B 10 t 法 分 析 M IP 一2 和 IC胡 eel 的 蛋 白表 达 水 平 在 LP S 攻 击 18 小 时 后 处 死 各 组 小 鼠 ，留取 肺 组 织 匀 浆 裂 解 ; 消 化 收 集 经 E G C G 预 处 理 和 T N 队 a 诱 导 8 小 时 后 的 H U V E C 。提 取 总 蛋 白 ，行 SD S 一PA G E 电泳 ，转 膜 ， 孵 育 以相 应 一 抗 、 二 抗 ，E C L 发 光 液 ， 曝 光 成 像 ， 以 p 一A cti n 为 内参 照 对 目的 条 带 的 积 分 吸 光 度 进 行 分 析 。 5 . 肺 组 织 M PO 活 力 测 定 在 LP S 攻 击 18 小 时 后 处 死 各 组 小 鼠 ， 留 取 肺 组 织 ，准 确 称 量 并 匀 浆 ，利 用 M P O 令 供 氢 体 邻 联 回 香 胺 供 氢 后 生 成 黄 色 化 合 物 在 46 0nm 处 有 最 大 吸 收 峰 的化 学 特 性 ， 用 分 光 光 度 法 检 测 。按 M P O 检 测 试 剂 盒 说 明操 作 和 换 算 。 6 . 唆 哇 兰 (淤 T) 试 验 鉴 定 HUV Ec 细 胞 活 力 贴 壁 长 满 75 % 的 % 孔 板 底 面 积 的 H U V E C ，经 不 同浓 度 E G C G 预 处 理 和 T N 下一a 诱 导 8 小 时 后 更 换 含 M T T 终 浓 度 sm 创m l 的 新 鲜 培 养 基 继 续 孵 育 4 小 时 ，吸 弃 上 清 加 入 二 甲基 亚 矾 (D M S O )，继 续 孵 育 半 小 时 ， 酶 标 仪 49 0翔m 波 长 处 测 O D 值 。 7 . H U V EC 跟 P翩 s 的 粘 附 实 验 取 健 康 成 年 人 外 周 血 10m l，用 中性 粒 细 胞 分 离 液 (聚 蔗 糖 一泛 影 葡 胺 分 层 液 ) 以 密 度 梯 度 离 心 法 得 到 较 纯 的 P M N s。 台 盼 蓝 拒 染 法 检 测 活 力 ， 血 清 培 养 基 重 悬 P M N s 。贴 壁 生 长 在 24 孔 板 底 的 H U V E C 经 E G C G 预 处 理 和 T N F 一a 诱 导 8 小 时 后 加 入 等 量 P M N s ， 再 共 孵 育 1 小 时 ， 结 束 后 轻 洗 去 未 粘 附 的 P M N s， 收 集 洗 脱 液 ，对 孵 育 前 和 洗 脱 液 中 的 P M N s 进 行 细 胞 计 数 ， 计 算 出粘 附 率 。 8 . 数 据 统 计 数 字 结 果 以均 数 士标 准 差 表 示 ，多 组 间 结 果 比较 采 用 单 因素 方 差 分 析 ，P 0 .05 认 为 有 统 计 学 显 著 性 差 异 。数 据 的 统 计 处 理 使 用 S P S S 10 .0 版 完 成 。 结 果 1 . E G C G 使 内 毒 素 诱 导 的 急 性 肺 损 伤 小 鼠肺 部 M IP 一2 的 m R N A 表 达 和 蛋 白合 成 呈 剂 量 依 赖 性 下 降 ， 差 异 具 有 统 计 学 意 义 (P 0 .05 )。 2 . 免 疫 组 化 和 组 织 病 理 发 现 E G C G 使 内 毒 素 诱 导 的 急 性 肺 损 伤 小 鼠肺 部 M IP一2 蛋 一3 - 浙 浙 江 大 学 硕 士 学 位 论 文 白表 达 减 少 ， 并 且 使 肺 间质 肿 胀 和 白细 胞 浸 润 情 况 减 轻 。 3 . E G C G 使 内 毒 素 诱 导 的 急 性 肺 损 伤 小 鼠肺 部 M P O 活 力 呈 剂 量 依 赖 性 下 降 ，差 异 具 有 统 计 学 意 义 (P 0.05 )。 4 . 50 p m o 班 的 E GC G 浓 度 导 致 了 T N F 一a 诱 导 的 H U V E C 和 正 常 生 长 的 H U V E C 的 凋 亡 增 加 (P 0 .0 5 )， 而 10 p m o F I、Z O p m o 扒 两 个 浓 度 的 E G C G 不 引 起 H U V E C 的 活 力 改 变 (P 0 .05 )。 5 . E G C G 使 T N T 一a 诱 导 的 H U V E C 的 IC A M 一1 的 m