尿刊酸修饰壳聚糖载基因纳米复合物的制备及体外.pdf

学 报 ５１６ ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　２０１１，４２（６）：５１６－５２１ 尿刊酸修饰壳聚糖载基因纳米复合物的制备及体外性质 １，２ ３ ４ １，２ １，２ １，２ 王　伟 ，王　玉 ，郑　枫 ，徐苏颖 ，丁　杨 ，周建平 １ ２ （中国药科大学药剂学教研室，南京２１０００９；中国药科大学天然药物活性组分与药效国家重点实验室， ３ ４ 南京２１０００９；南京医科大学药理学系，南京２１００２９；中国药科大学药物分析学教研室，南京２１０００９） 摘　要　制备新型壳聚糖衍生物———尿刊酸修饰壳聚糖（ＵＡＣ）／质粒ＤＮＡ（ｐＤＮＡ）纳米复合物，采用凝胶电泳阻滞实 验评价ＵＡＣ包裹ｐＤＮＡ的能力；通过对各种影响因素（包括ｐＨ、渗透压、脱氧核糖核酸酶及肝素）的考察，对该纳米复合物 的稳定性进行评价；利用激光粒度仪测定该纳米复合物的粒径和Ｚｅｔａ电位，透射电镜对其进行形态学观察。研究结果表 明，高取代度（５００％）的载体ＵＡＣ在氮磷比（Ｎ／Ｐ） ３时将ｐＤＮＡ完全包裹形成纳米复合物；Ｎ／Ｐ越高，该纳米复合物对 ≥ 碱性环境、高渗透压、ＤＮａｓｅ 、肝素的稳定性越好；低相对分子质量壳聚糖（２０ｋＤ）的ＵＡＣ能够更有效地保护ｐＤＮＡ免受 Ⅰ ＤＮａｓｅ 的降解，且形成的纳米复合物较容易被肝素解聚；Ｎ／Ｐ为３０的纳米复合物的粒径为１２５２ｎｍ，Ｚｅｔａ电位为＋３７９ Ⅰ ｍＶ，呈类球形结构。因此，高取代度、低相对分子质量壳聚糖的载体ＵＡＣ与ｐＤＮＡ形成高Ｎ／Ｐ的纳米复合物能够具有良好 的特性，适合进行细胞转染实验，有望成为一种新型载基因纳米复合物。 关键词　尿刊酸修饰壳聚糖；质粒ＤＮＡ；纳米复合物；凝胶电泳阻滞实验；稳定性 中图分类号　Ｒ９４４　　文献标识码　Ａ　　文章编号　１０００－５０４８（２０１１）０６－０５１６－０６ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄｉｎｖｉｔｒｏｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆｕｒｏｃａｎｉｃａｃｉｄｍｏｄｉｆｉｅｄｃｈｉｔｏｓａｎ／ ＤＮＡｎａｎｏｃｏｍｐｌｅｘｅｓ １牞２ ３ ４ １牞２ １牞２ １牞２ ＷＡＮＧＷｅｉ牞ＷＡＮＧＹｕ牞ＺＨＥＮＧＦｅｎｇ牞ＸＵＳｕｙｉｎｇ 牞ＤＩＮＧＹａｎｇ 牞ＺＨＯＵＪｉａｎｐｉｎｇ １ ２ ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ牞ＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ牞Ｎａｎｊｉｎｇ２１０００９牷ＳｔａｔｅＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＮａｔｕｒａｌＭｅｄｉｃｉｎｅｓ牞Ｃｈｉｎａ ３ ４ ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ牞Ｎａｎｊｉｎｇ２１０００９牷ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ牞ＮａｎｊｉｎｇＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ牞Ｎａｎｊｉｎｇ２１００２９牷Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＡｎａｌｙｓｉｓ牞ＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ牞Ｎａｎｊｉｎｇ２１０００９牞Ｃｈｉｎａ Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ａｎｏｖｅｌｃｈｉｔｏｓａｎｄｅｒｉｖａｔｅ牞ｕｒｏｃａｎｉｃａｃｉｄｍｏｄｉｆｉｅｄｃｈｉｔｏｓａｎ牗ＵＡＣ牘ｗａｓｂｉｎｄｉｎｇｐｌａｓｍｉｄＤＮＡ牗ｐＤ ＮＡ牘ｔｏｐｒｅｐａｒｅｎａｎｏｃｏｍｐｌｅｘｅｓ．Ｔｈｅａｂｉｌｉｔｙｔｏｆｏｒｍｎａｎｏｃｏｍｐｌｅｘｅｓｗａｓｅｖａｌｕａ