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肝细胞生长因子作用于大鼠皮瓣的实验研究外科学专业论文

河北医科大学 河北医科大学 学位论文使用授权及知识产权归属承诺 本学位论文在导师(或指导小组)的指导下,由本人独立完成。 本学位论文研究所获的研究成果,其知识产权归河北医科大学所有。 河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学 位论文主要内容相关的论文,第一署名单位为河北医科大学,试验材 料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则, 承担相应的法律责任。 。”每,:,.、. : 。? ’置: 研究生躲关硝导师虢骰学院领导虢≥莎越i :岫.,芬年亨月圩日 “款 。·?夕 一, _。“ 河北医科大学 研究生学位论文独创性声明 本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果,除了 文中特别加以标注和致谢等内容外,文中不包含其他人已经发表或撰 写的研究成果,指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写, 文责自负。 研究生签名关斜新躲愀 少一9年弓月谚日 中文摘要肝细胞生长因子作用于大鼠皮瓣的实验研究 中文摘要 肝细胞生长因子作用于大鼠皮瓣的实验研究 摘 要 目的:皮瓣远端坏死是整形重建外科经常遇到的问题。 研究证实,一些生长因子如VEGF及bFGF可通过血管生成 等机制提高皮瓣的存活率。基础研究证明,肝细胞生长因子 (Hapatocyte Growth Factor,HGF)具有更强大的促进血 管生成作用,但相关文献报道对皮瓣存活的促进作用尚不明 确。为发掘HGF在促进随意皮瓣远端存活方面的作用,本 研究拟建立超长皮瓣动物模型观察HGF对促进超长皮瓣存 活的影响,并通过实验病理技术观察用药与否的试验动物皮 瓣的组织变化及血管生成情况。 方法:以20只4月龄、雄性、300—3509体重的Wistar 大鼠为实验动物,分别建立大鼠背部8cmx2cm(长宽比为 4:1)随意皮瓣动物模型。实验动物随机分为二组,每组 l O只,分别为HGF组、生理盐水组(对照组)。HGF(购自 英国Pepro 7Fech公司)以无菌生理盐水配成浓度为1 00ng/ml 的工作溶液。试验组大鼠皮瓣掀起后即刻用4—0丝线原位缝 合,用微量注射器抽取HGF工作溶液lml,选择距皮瓣边 缘O.5cm处均匀分布的lO点垂直注入受区表面,每点注射 0.】ml。同法用微量注射器取用生理盐水1 ml注射对照组大 鼠皮瓣。两组术后6小时、12小时经背部重复给药。术后 每天观察皮瓣颜色、质地、温度、毛细血管回流等。术后7 天,将大鼠处死,以透明纸绘出皮瓣模型,将坏死区与成活 区界限标出,剪成两部分。用电子称称量,以称纸得出的重 主查塑墨 主查塑墨 量代表面积的方法计算,按(成活部分/设计部分)×100%计 算出成活面积比。实验组和对照组大鼠术后7天取距蒂部4 cm处皮瓣中段2 mm横断组织,10%甲醛固定,常规石蜡 包埋,HE染色,光镜下观察其组织学变化。由于血管壁有 抗原CD34,为此我们使用免疫组织化学分析方法检测 CD34的阳性表达,标记皮瓣皮下平均血管数目。应用 SAS6.1 2统计软件进行统计分析:组与组之间的比较采用t 检验。P0.05为有统计学意义,P0.01为有显著性差异。 结果:本实验结果显示:术后1天,两组皮瓣弹性较好, 皮瓣下无明显积血积液,皮温、色泽正常,两组差别不显。 术后4天,各组皮瓣远端出现不同程度色泽变暗,轻度水肿。 术后7天,各组皮瓣坏死与成活区分界明显。术后7天, HGF组皮瓣成活率为75.13+3.02%,明显高于生理盐水组 (62.01+2.5 1%),有非常显著性差异(PO.01)。实验组与对照 组相比表皮萎缩、皮下组织水肿均减轻,血管扩张、炎性细 胞浸润均减少。光镜下病理可见:实验组表皮萎缩不明显, 皮下组织无明显水肿,血管轻度扩张,无明显炎性细胞浸润; 而对照组表皮萎缩明显,表皮变薄,皮下组织水肿和血管扩 张明显,有明显炎性细胞浸润和皮下纤维组织增生。对照组 皮瓣存活区新生血管和肉芽组织增生明显少于实验组。免疫 组化检测CD34标记的皮瓣微血管数目,400倍光镜下观察 切片,随机选取5个视野进行血管断而计数,实验组为 (136.25122.35)个,对照组为(89.55±14.44)个,实验组微血 管数目明显多于对照组,两组之间有显著差异(PO.05)。 这~结果提示HGF有改善皮瓣远端血供,促进随意皮 瓣存活的作用。HGF具有促进血管内皮细胞增生、迁移和 一. 一. 主查塑墨 新生血管形成的作用,可用于治疗各种原因所致组织缺血性 疾病;能调节胶原纤维的合成和炎性反应,促进组织细胞的 发生、生存和再生,在治疗创伤愈合、防治组织纤维化中起 着重要作用。我们推测,HGF对超长比例随意皮瓣的存活 改善作用主要通过以上机制尤其是促进皮瓣远端血管生成 作用实现。 结论:肝细

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