低频强噪声对巴马香猪内耳损伤及机制研究耳鼻咽喉科学专业论文.docxVIP

解放军医学院硕士学位论文作 解放军医学院硕士学位论文 作 者：徐海艳 导 师：吴玮 学科专业：耳鼻咽喉科学 低频强噪声对巴马香猪内耳损伤及机制研究 中文摘要 目的：建立经低频强声暴露的巴马香猪噪声性耳聋模型。通过对巴马香猪低 频强声暴露后不同时刻行听性脑干反应(Auditory Brainstem Response，ABR)检 测、观察其行为学变化、前庭结构及耳蜗毛细胞表面结构形态、内耳凋亡因子天 冬氨酸特异性的半胱氨酸蛋白酶一3(Caspase．3)免疫组织化学及免疫荧光染色， 了解正常组巴马香猪耳蜗内、外毛细胞形态变化，低频强声对巴马香猪听功能损 伤程度、耳蜗毛细胞表面结构及前庭器官形态的影响及内耳凋亡因子的表达。初 步观察低频强声对巴马香猪位听器官损伤特点，探讨其损伤产生的相关机制。 方法：将8只巴马香猪随机分为对照组(2只)及实验组(6只)，均于实验 前行听性脑干反应检测，将实验组再随机分为暴露后即刻组、暴露后36小时组及 暴露后84，J、时组，每组2只。实验组动物暴露于50Hz，142dBSPL的低频噪声 中5分钟，再分别于暴露后即刻、暴露后36小时及暴露后84小时观察行为学变 化，并行ABR检测，然后在扫描电镜下观察各组动物耳蜗毛细胞表面结构及前 庭器官的形态变化；用免疫组织化学染色检测各组动物内耳相应结构上Caspase-3 的表达；用免疫荧光4’，6．二脒基．2．苯基吲哚二盐酸盐(DAPI)标记细胞核方法 进一步观察证实毛细胞胞质中Caspase一3的表达情况，同时通过细胞计数方法计 算毛细胞缺失率以判定细胞死亡情况．对照组巴马香猪除不暴露于噪声环境外， 其他与实验组巴马香猪处理相同。 结果：8只(16耳)巴马香猪低频强声暴露前ABR阈值为91．25士10．72 dBSPL； 实验组所有动物低频强声暴露后双耳ABR阈值均未能引出。实验动物在强声暴 万方数据 解放军医学院硕士学位论文露过程中多安静不动，暴露后即刻出现短暂站立、行走不稳，未见眼震；暴露后 解放军医学院硕士学位论文 露过程中多安静不动，暴露后即刻出现短暂站立、行走不稳，未见眼震；暴露后 第2天巴马香猪活动基本恢复正常，但活跃程度仍有所下降；实验组动物球囊斑 及椭圆囊斑扫描电镜下耳石及感觉细胞的纤毛未见明显异常。噪声暴露后即刻组 扫描电镜下可见内、外毛细胞气球样变，外毛细胞静纤毛融合及散在性缺失；噪 声暴露后36小时组可见内、外毛细胞轻度气球样变及其静纤-L-R-舌L；噪声暴露后 84小时组耳蜗基底回可见内、外毛细胞缺失，中回及顶回内、外毛细胞静纤毛缺 失且以第三排外毛细胞静纤毛缺失最重。噪声暴露后毛细胞表面结构损伤以基底 回及中回为主，顶回损伤较轻。巴马香猪耳蜗各部位均可见Caspase一3阳性表达， 随着暴露后时间延长，Caspase．3阳性表达逐渐减弱。免疫荧光方法可见噪声暴露 后即刻组、暴露后36小时组与正常对照组相比较，三排外毛细胞排列及层次明显 错乱；同时免疫荧光染色可见噪声暴露后84小时组三层外毛细胞消失，仅可见一 层内毛细胞。 结论：经50Hz，142dBSPL低频强声暴露后，巴马香猪双耳听功能受损；内 耳结构出现凋亡殁机械性损伤。低频强噪声对巴马香猪听功能的损伤符合损伤随 着噪声强度的增强而增强的特点。低频强声在损伤毛细胞的同时亦可诱导螺旋神 经节的凋亡。 关键词：低频强声；小型猪；听性脑干反应；扫描电镜；含半胱 氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶．3 2 万方数据 解放军医学院硕士学位论文Study 解放军医学院硕士学位论文 Study of low--frequency high-·intensity stationary noise on damage and mechanism of inner ear in bama pigs Abstract objective Establish bama pigs animal model of low frequency high imensity stmionary noise—induced hearing loss．By Audffory Brainstem Response(ABR) test／observing behavioral change／observing vestibular organ and hair cell surface structure／immunohistochemistry and fluorescent antibody technique of Caspase一3 on barna pigs，understand morphological changes of inner／outer hair cell surface and vestibular