蟾毒灵通过诱导细胞凋亡和化疗增敏在非小细胞肺癌细胞中发挥抗肿瘤作用肿瘤学专业论文.docxVIP

CATAI，OGUEChinese CATAI，OGUE Chinese abs觚t ．．1 English ab咖ct ．．5 Abbreviation ．9 Sul砌耻y ．．10 PanOne · 。14 Materials a11d Metllods ．15 Results ．．20 Discussion ．．21 Pan tⅥro ．22 Materials aIld M劬ods ．24 Results ．．31 Discussion ．．33 Part n1I．ee 一35 Materials aJld Metllods ．37 Results ．．39 Discussion ．．40 Conclusions ．42 Figures ．43 Ref．erences 48 Acknowledgements ．56 Publications ．57 万方数据 山东大学硕士学位论文蟾毒灵通过诱导细胞凋亡和化疗增敏在非小细胞肺癌细胞 山东大学硕士学位论文 蟾毒灵通过诱导细胞凋亡和化疗增敏在非小细胞肺癌细胞 中发挥抗肿瘤作用 专业：肿瘤学 硕士生：杨璐 导师：王秀问教授 中文摘要 肺癌是是世界范围内发病率最高的恶性肿瘤，其中非小细胞肺癌(non．small ceU lⅢlg caIlcer，NSCLC)占全部肺癌的80％以上，居肿瘤死亡原因之首。NSCLC 生物学特征为易发生局部浸润和远处转移，多数患者在诊断时己处于局部晚期或 有远处转移，整体五年生存率仅15％。对于此部分患者，第三代新药联合铂类为 的化疗是一线治疗，对顺铂敏感性下降是疗效降低的主要原因，往往导致治疗失 败。因此，迫切需要探索新的治疗方案。 既往的临床试验研究证实许多自中草药具有有效抗肿瘤作用，许多中药也已 经用于肿瘤的辅助治疗。蟾毒灵作为中草药蟾酥的提取物之一，相对分子质量为 386．5，属强心甙类物质。研究发现，其可以通过调控不同的分子通路对多种实 体肿瘤如胰腺癌、胃癌、乳腺癌产生抗瘤作用，也有研究证实蟾毒灵可抑制肺癌 细胞的增殖，但其机制尚不明确。此外，另有研究表明蟾毒灵具有化疗增敏作用， 甚至可以逆转肿瘤细胞的耐药性。然而，蟾毒灵对NSCLC细胞的抗肿瘤机制以 及化疗增敏作用尚不明确。 本实验旨在研究蟾毒灵对NSCLC细胞的作用及潜在分子机制，探索蟾毒灵 对NSCLC顺铂化疗敏感性的影响及可能参与机制，我们选用A549和H1975这 万方数据 山东大学硕士学位论文两株NSCLC细胞为模型，分三个部分进行研究。 山东大学硕士学位论文 两株NSCLC细胞为模型，分三个部分进行研究。 第一部分 蟾毒灵对非小细胞肺癌A549和H1 975细胞增殖的影响 目的：研究蟾毒灵是否抑制NSCLC细胞增殖能力及迁移能力。 方法：利用不同浓度的蟾毒灵分别处理A549和H1975细胞24h、48h和72h， 采用CCK．8法检测细胞增殖活性的改变，采用划痕实验观察细胞迁移能力改变。 结果：A549和H1975细胞经不同浓度(2．5nM，5nM，10洲，20nM，40nM， 80nM，100洲，200IlM)的蟾毒灵处理后，两株细胞均呈现为：经低浓度蟾毒 灵(2．5nM，5nM)处理后细胞存活率在98％左右，表明细胞增殖能力无明显抑 制；细胞经较高浓度(10～200nM)蟾毒灵处理后，细胞增殖受到明显抑制且这种 抑制作用随着蟾毒灵浓度的增加，细胞的增殖抑制率增加，蟾毒灵的作用于细胞 的时间的越长，细胞的增殖抑制越明显。划痕实验结果表明，细胞经蟾毒灵处理 后，细胞迁移能力下降，划痕愈合能力降低，且药物浓度越高，对细胞迁移能力 抑制越明显。 结论：蟾毒灵可以诱导A549和H1975细胞产生与浓度和作用时间相关的增 殖抑制与迁移能力下降。 第二部分 蟾毒灵对非小细胞肺癌细胞凋亡的影响及可能的分子机制 目的：研究蟾毒灵对A549和H1975细胞凋亡的影响及可能参与机制。 方法：以不同浓度的蟾毒灵(0nM，lO洲，20nM)作用于A549和H1975细 胞48h，采用流式细胞术检测药物对细胞凋亡比率影响；采用westem blotting技 术检测A549和H1975细胞中凋亡蛋白p唧及W州p—catenin信号通路相关蛋白 p-catenin及其下游分子c—myc和cyclinDl的表达，以及干细胞标记0ct．4表达 水平。 结果：对细胞凋亡比率的检测结果表明，两株细胞均表现为：随着蟾毒灵浓 度的增加，细胞的凋亡比率呈现增加趋势，这个现象说明蟾毒灵可以诱导细胞凋 万方数据 山东大学硕士学位论文亡，且药物浓度越高，凋亡比率越高。Westem 山东大学硕士学位论文 亡，且药物浓度越高，凋亡比率越高。Westem blotting显示，药物处理后，脚 被降解，而cleaved．PARP