《SNT1247.1-2003-猪繁殖和呼吸综合征间接免疫荧光试验》.pdfVIP

SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T1247.1-2003 猪 繁 殖 和 呼 吸 综 合 征 间 接 免 疫 荧 光 试 验 Protocolofindirectimmunofluorescenceassayfor porcinereproductiveandrespiratorysyndrome 2003-05-28发布 2003-12-01实施 中 华 人 民 共 和 匡 国家质量监督检验检疫总层 SN/T 1247.1-2003 前 言 本标准根据世界动物卫生组织(OIE)(哺乳动物、禽和蜜蜂A和B类疾病诊断试验和疫苗标准手 册》(第四版，200的第三部分X.12的内容编写。 本标准的附录A、附录B为规范性附录。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位:中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局。 本标准主要起草人:孙延峰、孙颖杰、苏永生、简中友、播凤城。 本标准系首次发布的检验检疫行业标准。 SN/T 1247.1-2003 猪 繁 殖 和 呼 吸 综 合 征 间接 免 疫 荧 光 试 验 范围 本标准规定了猪繁殖和呼吸综合征的间接免疫荧光试验诊断方法。 本标准适用于猪繁殖和呼吸综合征的诊断、流行病学调查、检疫和疫情监测。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准.然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T6682-1992 分析实验室用水规格和试验方法 缩略语 下列缩略语适用于本标准。 3.1 IFA 间接免疫荧光试验。 3.2 FITC 异硫袱酸荧光黄。 3.3 PRRS 猪繁殖和呼吸综合征。 检验检疫 4.1 原理 接免疫荧光试验是将抗原吸附于固相载体上，抗原与抗体反应后，再用荧光素标记的抗抗体与其反 应形成抗原一抗体一抗抗体复合物，在荧光显微镜下可见荧光。 本标准是以96孔板为载体，将接种猪繁殖和呼吸综合征病毒的细胞固定于96孔板上，依次加人被 检血清和用FITC标记的兔抗猪抗体，反应结束后，置荧光显微镜下观察结果。 4.2 采样 采集被检猪血液，分离血清，血清必须新鲜透明不溶血无污染，密装于灭菌小瓶内，4℃或一20℃一 30℃冰箱保存或冷藏条件下立即送检。试验前将被检血清统一编号。 4.3 设备和材料 4.3.1 仪器设备 — 微量移液器; — 保湿盒; — 普通恒温箱及二氧化碳恒温箱; — 普通冰箱和低温冰箱; — 倒置显微镜; — 荧光显微镜; SN/T 1247.1-2003 — 量筒、烧杯等。 4.3.2 材料和试剂 - MARC-145或HS2H细胞由国家质检总局认可的单位提供; - PRRS美洲标准株ATCCVR-2332或欧洲标准株LV标准毒由国家质检总局认可的单位 提供 ; - PRRS病毒标准阳性血清和标准阴性血清由国家质检总局认可的单位提供; - FITC标记的兔抗猪抗体由国家质检总局认可的单位提供， - MEM营养液(含1000犊牛血清); - PBS液(见附录A); - E