《SNT1048-2002-进出口粮食、饲料大麦品种鉴定蛋白质电泳分析法》.pdfVIP

进 出口粮食、饲料大 麦品种鉴定蛋白 质电 泳分析法 Cereals and feedstuffs for import and export— Identification for barley variety— Method of protein electrophoresis SN/T 1048— 2002 前 言 本标准是按照GB/T 1.1— 1993 《标准化工作导则第1单元：标准的起草与表述规则第1部分：标准编写的基本规定》的要求进行编写的，其中测定 方法参照国内外有关文献，经研究、改进和验证后而制定的。 本标准的附录A是提示的附录。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准负责起草单位：中华人民共和国上海出入境检验检疫局。 本标准主要起草人：潘良文、陶军、关裕亮。 本标准系首次发布的检验检疫行业标准。 1范围 本标准规定了进出口大麦品种鉴定的方法。 本标准适用于进出口大麦品种的鉴定。 2引用标准 下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的 各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。 SN/T 0798— 1999进出口粮油饲料检验检验名词术语 SN/T 0800.1— 1999进出口粮油饲料检验抽样和制样方法 3定义 除按照SN/T 0798中的定义执行外，本标准还采用下列定义。 3.1 品种variety 在长期自然选择下生长的或经过人工培育出的作物的不同栽培种。 3.2 品种鉴定variety identification 用物理的或化学的方法区分作物的不同品种。 3.3 醇溶蛋白质hordeins 种子中溶解于醇类的、能用含有醇类的缓冲液提取的一组储藏蛋白质。作物不同品种的种子内所含醇溶蛋白各组分不一样，各组分蛋白质受不同 的基因所编码。 4抽样和制样 按照SN/T 0800.1中规定的方法执行。 5检验 5.1 原理 大麦的醇溶蛋白通过垂直平板电泳能有效地分离，经银染后得到电泳图谱，各种大麦的醇溶蛋白电泳图谱是品种的固有特性，对其进行比较分析 可以鉴定大麦品种。 5.2 试剂 所有实验用试剂均为分析纯；除特别说明外，实验用水为蒸馏水或相应的去离子水。 5.2.1 50%丙醇缓冲液 称取0.50 g三羟甲基氨基甲烷 (Tris)，加入25mL蒸馏水和50mL 1-丙醇，用硼酸调至pH8.6，加水定容至100mL，在4℃下保存。 5.2.2提取液 称取0.10 g二硫代苏糖醇 (DTT)，加入50%丙醇缓冲液10mL，在4℃下保存。 5.2.3 含有乙烯吡啶的缓冲丙醇溶液 μ 吸取72.0 L 4-乙烯吡啶，用50%丙醇缓冲液定容至5mL，储于-20℃保存，配制后当天使用。 5.2.4 0.5%溴酚蓝溶液 称取0.50 g溴酚蓝，加蒸馏水定容至100mL，在4℃下保存。 5.2.5 含有溴酚蓝的样品缓冲液 称取0.50 g Tris，40.0 g甘油和2.0 g十二烷基磺酸钠 (SDS)，加入30mL蒸馏水和4.0mL 0.5%溴酚蓝溶液，用硼酸调至pH8.6，加水定容至 100mL。 5.2.6 N，N，N’ ，N’ -四甲基乙二胺 (TEMED) 5.2.7 25%丙烯酰胺溶液 μ 称取61.25 g丙烯酰胺，1.25 g N,N’ -亚甲双丙烯酰胺，用蒸馏水定容至250mL，用0.45 硝基纤维素微孔膜过滤，在4℃下保存。 注： 丙烯酰胺和N，N’ -亚甲双丙烯酰胺是神经毒素，在配制溶液、灌胶和染色过程中要带上防护手套。 5.2.8 分离胶缓冲液 称取60.55 g Tris，1.33 g SDS，加入100mL蒸馏水，用盐酸 (1+1)调至pH9.2，加水定容至200mL。 5.2.9 浓缩胶缓冲液 称取15.14 g Tris,2.5 g SDS，加入蒸馏水50mL，用盐酸