小儿神经母细胞瘤血清特异性蛋白的筛选与鉴定.pdfVIP

中文摘要 最佳激光能量及检测灵敏度。参数调节完毕后，将芯片板装入质谱仪，利用 MELDI—TOF—MS平台，收集数据，应用软件处理数据，得到各样本中的m／Z峰， 其中差异小于0．3％的考虑为一类。在结果收集完毕后，将不同组间的II比峰值 的数据运用wilcoxon秩和检验，P值越小，其表达强度的差异就越大，表明这 两组不同的样本的差异越有研究意义。肿瘤组与正常组、S瓜S组与正常组中均 得到两组差异性m／z峰值，范围±0．3％，进而发现在肿瘤血清和正常小儿血清、 SIRS患儿与正常组患儿间的差异性蛋白。筛选完毕后，制备胶体，收集肿瘤血 清2ml，加入超纯水稀释到5m1，进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS—PAGE)分离，分离结束后在对应的分子量轴上切胶，分装至不同的EP管 中，根据胶内酶解试剂盒说明书，酶解出目标蛋白。加入提取液后，提取上清 液。将上清液添加基质后，在蛋白质芯片板上点样，放入MALDI—TOF／TOF，通 过激光轰击，收集肽段序列，然后通过Mascot软件，与S、ⅣissPmt数据库连接、 匹配及比对，最终得到目标蛋白质。 结果 1．神经母细胞瘤血清组与正常对着组的数据经过滤筛选后得出尸值小于0．01 的II此峰11个，经过统计学分析，在有显著差异的蛋白质峰任意组合中， 应用sVM筛选出预测值的阳性率与阴性率之差(youden指数)最高的组合 模型，筛选出m／z位于5920的蛋白质标志物，在神经母细胞瘤术前组高表 差异有统计学意义∽O．01)。 2．SmS组与对照组数据经过统计学分析，得出P0．01的特异性高表达6个， 低表达4个，同样参考youden指数最高的模型，得到In／z位于5747的蛋 白质标志物，在炎症组中高表达(强度为514．9±361．3)，正常组明显低表达 (强度24．6±13．4)，差异有统计学意义。 3．通过对两组结果的比较，峰值位于5920的蛋白质在炎症组与正常组的比较 结果中，未发现近似值(范围±0．3％)，确定肿瘤特异蛋白5920为非炎性蛋 白。 4．利用MAI，DI—TOF厂r0F平台对经过分离、纯化、酶解的肽段混合物进行检测， c．III(类载脂蛋白c．III)． 州z峰位于5920的蛋白质经鉴定为类Apo IV 中文摘要 结论 M／z峰位于5920的蛋白质经鉴定为类Apoc．III，与现行临床常用的NEs， LDH，sF等肿瘤标志物可联用，组成完善的血清蛋白质指纹图谱模型，对神经 母细胞瘤早期诊断、手术效果及预后监测具有重要意义。ApoC—III在小儿神经 母细胞瘤血清中的发现，实验结果证明肿瘤血清中存在类脂化合物，对于后期 研究脂类代谢与肿瘤发生、发展的关系具有指导意义。 c．III 关键词：神经母细胞瘤蛋白质组学类载脂蛋白cIII类Apo V Abs臼act of associatedin andidenti6cation Screening proteins childrenneuroblastoma Pei PoStg阳d1IateHaIlg SupervisorProf．Jia)【iallgWallg ofPediatric DepaurⅡIlent Surge巧 TheFirstA衄iated of Hos