《SNT1166.2-2002-水泡性口炎微量血清中和试验操作规程》.pdfVIP

SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SNIT1166.2-2002 水泡性口炎微量血清中和试验操作规程 Protocolofmicro-serum neutralization testforvesicularstomatitis 2002一11一25发布 2003一05一01实施 中 华 人 民 共 和 国 。* 国家质 量监督检验检 疫总局 认-Il. SN/T1166.2-2002 oli 胃 水泡性口炎(VesicularStomatitis,VS)血清中和试验是在参考国际兽疫局(OIE)Q哺乳动物、禽和 蜜蜂A和B类疾病诊断试验和疫苗标准手册》和实践经验的基础上制定。 本标准的附录A为资料性附录。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位:中华人民共和国云南出人境检验检疫局。 本标准主要起草人:花群义、周晓黎、徐 自忠、杨晶焰。 本标准系首次发布的检验检疫行业标准。 SN/T1166.2-2002 水泡性口炎微量血清中和试验操作规程 范 围 本标准规定了水泡性口炎病毒中和试验方法。 本标准适用于动物水泡性口炎病毒抗体和定型检测。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T6682-1992 分析实验室用水规格和试验方法 (eqvISO 3696:1987) 缩略语 下列缩略语适用于本标准。 3.1 CPE:致细胞病变作用。 3.2 TCID,o:半数组织培养感染量。 3.3 VSV:水泡性口炎病毒。 3.4 VSV-NJ:水泡性口炎病毒新泽西型;VSV-IND水泡性口炎病毒印地安那型。 原理 特异性的血清中和抗体与病毒结合后，能够抑制病毒对敏感细胞的吸附，使其失去感染能力，从而 阻止病毒在细胞中的复制。这一反应不但表现为一种病毒只能被相应的免疫血清所中和，而且还表现 在中和一定量的病毒(感染力)必须有一定效价的免疫血清。中和试验以测定病毒的感染力为基础，必 须选用病毒易感的细胞为材料，中和抗体滴度的判定以比较病毒受免疫血清中和后的残存感染力为依 据 。动物在感染水泡性口炎病毒后4d^-5d即可产生特异性抗体。中和抗体具有高度的型特异性，因 此 ，通过中和试验可进行定型鉴定。 5 试 剂和材料 5.1病毒:VSV-NJ和VSV-IND国际标准毒株，由指定单位提供。 5.2血清;VSV两型标准阳性血清、阴性血清，由指定单位提供。 5.3被检血清:牛、猪血清经60C30min灭活。马血清经650C30min灭活。 5.4 细胞:BHK,，或Vero细胞株。 5.5 培养液:E-MEM细胞生长液，参见附录Ao 5.6 维持液和稀释液:E-MEM细胞维持液，参见附录A, 5.7 细胞分散液:参见附录A, 5.8 水:符合GB/T6682-1992分析实验室二级水规格。 器械和设备 分析天平、高压灭菌器、干烤箱、超声波粉碎机、倒置显微镜、微型振荡器、二氧化碳培养箱、冰箱 (一20℃保存血清，一70℃保存种毒)。96孔组织培养板，单孔道、多孔道微量移液器(20pL-200pL)。 SN/T1166.2-2002 试验操作方法 7.1 病毒份殖 制备BHKZ，或Ver。细胞单层，加维持液洗去细胞培养液中的犊牛血清后，弃维持