《SNT1159-2002-植物检疫椰子红环腐线虫检疫鉴定方法》.pdfVIP

植物检疫 椰子红环腐线虫检疫鉴定方法 Plant quarantine-Methods for inspection and identification of Bursaphelenchus cocophilus (Cobb, 1919) Baujard SN/T 1159-2002 前 言 本标准的附录A、附录B为资料性附录，附录C为规范性附录。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国海南出入境检验检疫局。 本标准起草人：李伟东、杨祖江、张宁、林萍。 1 范围 本标准规定了植物检疫中椰子红环腐线虫的检疫鉴定方法。 本标准适用于植物检疫中棕榈科植物(包括种果、苗木等繁殖材料)椰子红环腐线虫的检疫和鉴定。 2 原理 椰子红环腐线虫(Bursaphelenchus cocophilus (Cobb，1919)Baujard 1989)属线虫门(Nematoda)，侧尾腺纲(Secernentea)，滑刃目 (Aphelenchida)，滑刃科(Aphelenchoididae)，伞滑刃属(Bursaphelenchus)。系一种移居性内寄生线虫。侵入后，在树干皮层下的薄壁组织内取食 和繁殖，然后进入茎的内部组织，并在中柱的外层扩散。在椰子树的根、茎、叶柄的组织内也能发现各龄期的幼虫。 椰子红环腐线虫的寄主(参见附录A)、地理分布(参见附录B)、生物学特性、传播途径和形态学特征为制定检疫鉴定方法提供了依据。 3 仪器用具 实验需要以下仪器： a) 显微镜； b) 体视解剖镜； c) 玻璃漏斗(直径10 cm～20 cm)； d) 铁架； e) 线虫滤纸； f) 钢制筛盆(筛孔直径为0.2 cm～0.5 cm)； g) 水浴锅； h) 斧头； i) 锯子。 4 化学试剂 福尔马林(40％甲醛)、三羟基乙酰胺、蒸馏水，TAF固定液(福尔马林:三羟基乙酰胺:蒸馏水=7:2:91)。 5 现场检疫 5.1 现场检查 查验待检的棕榈科植物材料的有关单证，核实产地、包装、唛头、品种和数量。逐件检查棕榈科植物繁殖材料的种果、苗木等是否有可疑疫情。 对于来自椰子红环腐线虫发生区域的材料，还应仔细检查装载运输工具和包装材料。然后，直接扦取有可疑症状的植物材料；如果没有发现任何可疑 症状，则按下述比例扦取样品。 5.2 抽样 5.2.1 种果的抽样 500粒以下取1份；501粒～2 000粒取2份；2 001粒～5 000粒取3份；5 001粒～10 000粒取4份；10 001粒以上每增加10 000粒增取1份样品，不 足10 000粒的余量，计取1份样品。每份样品为20粒。 5.2.2 苗木的抽样 50株以下抽取5株；50株～200株抽取10株；201株～1 000株抽取15株；1 001株～5 000株抽取20株；5 000株以上每增加5 000株增取5株，不足5 000株的余量，计取5株样品。 5.3 土壤的收集 小心收集植物材料上粘附的土壤，并注意收集包装内外散落的土壤。 5.4 栽培介质的收集 收集植物材料上的栽培介质。 6 实验室检验 6.1 外观症状的检查 仔细检查叶片有无发生黄化、枯死、叶片变小硬化，用斧头和锯子横切植株茎干，检查有无变色组织或变色环；检查椰果外壳及其他棕榈科植物 有无变色腐烂组织；纵切植株茎于和根部，特别关注是否有虫蛀隧道及象甲等昆虫幼虫与成虫。 该病的症状为植株茎干表层下出现一条坏死组织带，带宽约3 cm，横切树干后，其横断面上会有砖红色或褐红色组织环带，叶柄和根的横断面有 相同症状；染病树呈现黄化，通常是较低部的叶片，从羽叶的先端开始，进而向叶基部扩展，接着变褐色。被线虫侵染的根系由白色变为黄色、粉红 色、暗黄色或红棕色，病根的皮层脱落。 该线虫还引起椰子树和油棕的小叶病，症状表现为叶片变小、僵硬、直立；羽叶短、铁丝状和末端坏死；叶基部和叶柄出现栓化斑块，较老的叶 片变成黄色至灰色。 6.2 线虫的分离 6.2.1 从植物组织中分离线虫 将植株材料(茎干、根部、叶柄及果实)切成片状，大小约2 cm× 2 cm× 0.5 cm的小片，用浅盆一漏斗法进