《SNT1226-2003-禽痘抗体检测方法红细胞凝集抑制试验》.pdfVIP

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 1226-2003 禽痘抗体检测方法 红细胞凝集 抑制试验 Detectionantibodiesagainstfowlpoxvirus-Protocolof hemagglutinationinhibitiontest 2003-05-28发布 2003-12-01实施 中 华 人 民 共 和 国 发 布 国家质 量监督检验检疫总局 SN/T1226-2003 前 言 本标准的附录A是规范性附录。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口. 本标准起草单位:中华人民共和国深圳出人境检验检疫局。 本标准主要起草人:林庆燕、卢体康、范万红。 本标准系首次发布的检验检疫行业标准。 SN/T1226-2003 禽痘抗体检测方法 红细胞凝集抑制试验 1 范 围 本标准规定了应用血凝抑制试验检测禽血清中抗禽痘病毒抗体的方法。 本标准适用于禽痘的流行病学调查、诊断、检疫和疫情监测。 2 引用标准 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T6682-1992分析实验室用水规格和试验方法(eqvISO3696:1987) 原理 本标准采用血凝抑制方法。该方法的原理是利用某些病毒或病毒的血凝素能选择地使某种或儿种 动物的红细胞发生凝集，当病毒的悬液中先加人特异性抗体，且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒或其血 凝素时，则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或其血凝素直接接触。这时红细胞的凝集现象就被抑 制。在已知的禽痘病毒悬液中，加人待检禽血清，若其含有抗禽痘病毒抗体，则能与禽痘病毒相结合，抑 制禽痘病毒的血凝作用，这种抑制作用的强弱与禽痘病毒抗体的含量有关。 仪器与试剂 4.1 仪器 96孔v型微量反应板、微量加样器、微量振荡器、离心机及离心管等。 4.2 试剂 4.2.1 禽痘病毒凝集抗原、抗禽痘病毒阴、阳性对照血清。 4.2.2 0.85环氯化钠、PBS液、红细胞保存液(阿氏液),0.5%鸡红细胞悬液。其配制方法见附录A, 4.2.3 待检血清及处理:无菌采集待检动物血液，离心分离血清,56℃水浴灭活30min, 4.2.4 试验用蒸馏水为GB/T6682-1992中的三级水。 操作方法 5.1 血凝试验 (HA) 5.1.1取干净的96孔v型微量反应板一块，按表1进行操作。 表 飞禽痘抗原血凝滴度测定 单位为微升 孔 号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 际原稀释倍叫2 4 8 16 32 64 128 256 512 1024 2048 对照 PBS 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 不 同稀 释 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 0 度 的抗原 o.5%红细胞 5O 50 so 50 50 50 50 50 50