常见畜禽动物源性成分检测方法实时荧光PCR方法.PDF

ICS 07.080 A40 中华人民共和国国家标准 GB/TXXXXX—XXXX 常见畜禽动物源性成分检测方法 实时荧光PCR 方法 Identification of animal ingredient from common livestock and poultry Real-time PCR 点击此处添加与国际标准一致性程度的标识 （征求意见稿） XXXX-XX-XX 发布 XXXX-XX-XX GB/T XXXXX—XXXX 前言 本标准按照GB/T1.1-2009 给出的规则起草。 本标准由全国生化检测标准化技术委员会（SAC/TC 387 ）提出并归口。 本标准起草单位： 本标准主要起草人： 1 GB/T XXXXX—XXXX 常见畜禽动物源性成分检测方法 实时荧光PCR 方法 1 范围 本标准规定了常见畜禽动物源性成分的实时荧光PCR 检测方法。 本标准适用于食品、饲料、动物组织、动物产品及制品中常见畜禽 （水牛、黄牛、牦牛、绵羊、 山羊、猪、骆驼、马鹿、梅花鹿、驯鹿、兔、狗、鸡、鸭、鹅、鹌鹑、鸽子、火鸡）及其他可能掺假品 种（猫、狐狸、水貂、貉、鼠）物种成分的Taqman 探针实时荧光PCR 定性检测，最低检出限 （LOD ） 达1% （质量分数）。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的，凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 27403 实验室质量控制规范食品分子生物学检测 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 实时荧光PCR real time PCR 在PCR反应体系中加入荧光基团，通过荧光信号的积累实时监控整个PCR扩增过程。 3.2 Ct 值 cycle threshold 每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数。 4 原理 利用实时荧光PCR 技术，根据不同物种的特异性基因序列对常见畜禽动物源性成分进行鉴定。以 提取的DNA 为模板进行内参照基因的实时荧光PCR 检测，以确定样品DNA 的提取质量；通过物种特 异性引物及探针进行畜禽动物源性成分的实时荧光PCR 扩增，根据PCR 扩增反应中每一个循环产物荧 光信号的强弱判定，实现对常见畜禽动物源性成分的定性检测。 5 检测用引物和探针 内参照引物探针序列和常见畜禽动物特异性引物探针序列见表1。探针5端标记荧光报告基团，3 端标记荧光淬灭基团。 表1 引物探针序列 2 GB/T XXXXX—XXXX 靶标物种 序列 基因来源 内参照 F ：TCTGCCCTATCAACTTTCGATGGTA