从益髓生血颗粒调控β珠蛋白及相关基因表达探讨肾生髓理论的分子机制中西医结合基础分子生物学专业论文.docxVIP

原创性声明本人郑重承诺：所里交的学位论文，是在导师的指导下独立完 原创性声明 本人郑重承诺：所里交的学位论文，是在导师的指导下独立完 成的，文中除注明引用的内容外，不包含任何其他已经发表的科研 成果。对本文研究做出主要贡献者，已在文中以明确方式表明。本 声明的法律责任完全由自己承担。 舻 ， 论文作者签名受垒丑导师签名望坌竺j日期兰型。 关于学位论文使用授权的声明 本人完全知道中国中医研究院有关保留使用学位论文的规定， 同意学校保留或向国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版， 允许被查阅和借阅。本人授权中国中医研究院可以将本学问论文的 全部和部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或 其他复印手段保存和汇编本学位论文。 (保密论文在解密后应遵守此规定) 论文作者签名嗑丝＆ 日期壁堕：±：主9 丛垄堕生堕墅塾塑量e：蔓里旦垦塑苤垂垦垂垄堡堕竖生墅堡堡盟坌王垫型 丛垄堕生堕墅塾塑量e：蔓里旦垦塑苤垂垦垂垄堡堕竖生墅堡堡盟坌王垫型 ! 中文摘要 本研究是在导师吴志奎研究员肾生髓理论现代研究与临床实践的学术思 想指导下，以国家自然基金资助课题为依托，把中医的理论思维和前沿技术 有机结合，对益髓生血颗粒治疗p一地中海贫血的整体效应和疗效的分子机制 进行研究。在该药取得显著临床疗效的基础上，采用ELISA、RT-PCR、激光 共聚焦显微镜扫描技术、凝胶滞后试验、real-time PCR、DD RT-PCR等实验 技术，从造血刺激因子的表达，p一珠蛋白基因簇LCRHS2序列DNA与蛋白 质相互作用，珠蛋白基因表达调控发挥重要作用的红系特异的反式作用因子 基因的表达，以及与红细胞溶血相关的铁蛋白基因表达等方面，多层次研究 了益髓生血颗粒治疗B．地中海贫血调控珠蛋白基因表达的分子机制，取得了 有学术价值的研究结果。 一、理论研究 1、从肾生髓与藏精的内在关系、肾生髓与髓养骨、肾生髓通于脑以及肾 生髓生血四个方面，对历代有关肾生髓理论的文献论述进行分析归纳，以期 加深对经典肾生髓理论的认识。通过对近年来有关肾生髓理论现代研究的相 关文献分析归纳，从肾生髓与神经系统功能的相关性、肾生髓和髓养骨物质 基础的现代研究、肾生髓与髓生血的客观性研究和肾生髓理论分子机制的研 究等方面，总结肾生髓理论的现代研究成果，为中医经典理论的现代研究探 索新的思路和方法。 2、通过对珠蛋白基因簇的组织及表达的时空顺序性、珠蛋白基因的结构 与表达、珠蛋白基因表达与红系分化起重要作用的转录因子、珠蛋白基因的 顺式作用元件以及D一珠蛋白基因簇位点调控区的功能等方面分析归纳，了解 珠蛋白基因表达调控的作用机制，更深入的认识珠蛋白生成障碍性贫血的发 病机制，为临床研究提供理论依据；总结导师多年来的运用补肾生血中药治 疗B．地中海贫血的研究成果，深入学习导师的学术思想和科研思路。 二、益髓生血颗粒调控珠蛋白及相关基因表达的研究 l、从两个方面对益髓生血颗粒治疗p一地中海贫血的整体效应进行了研 究，研究结果如下：①采用随机单盲安慰剂平行对照进行临床观察，研究结 果显示：治疗组血液学参数I-Ib、RBC、Ret、HbF自给药第1个月至治疗结 束均明显提高，安慰剂对照组无明显变化； 治疗组患者肝脾肿大明显缓解， B超显示患者脾脏横径治疗后明显小于治疗前；治疗后患者临床中医证候明 中文摘要显改善，临床证候的明显改善与血液学参数的升高有很好的一致性。②激光 中文摘要 显改善，临床证候的明显改善与血液学参数的升高有很好的一致性。②激光 共聚焦显微镜扫描技术显示：患者经益髓生血颗粒治疗后，骨髓幼稚红细胞 内DNA和RNA的荧光强度明显提高，表明益髓生血颗粒对维持骨髓早期造 血细胞的正常结构和生理形态有促进作用。 2、通过ELISA、real-time PCR技术，检测患者外周血和骨髓造血刺激因 子的表达，研究显示：益髓生血颗粒可以明显提高患者骨髓中GM—CSF的表达， 干预由GM—CSF介导的造血祖细胞的分化过程，促进有效红细胞生成，缓解贫 血症状；益髓生血颗粒通过增加患者外周血中c—kit基因的表达量，调节 SCF／c—kit信号传导途径，恢复患者在红系祖细胞和多种造血细胞分化成熟过 程中出现的异常病理改变，达到治疗目的。益髓生血颗粒对造血祖细胞的分 化和成熟的调节，还体现在改变患者体内EPO和EPO R基因的表达量方面。通 过降低造血刺激因子EPO的表达，促进有效红细胞生成，HbF合成增加，降低 游离0【一珠蛋白链的毒害作用；降低EPO R基因的表达量，减少无效红细胞的 生成，使正常造血功能得到恢复。通过上述实验研究结果，我们认为益髓生 血颗粒可以调节造血刺激因子基因表达，干预SCF—GM—CSF—EPO轴的生理 功能，证明SCF—GM—CSF—EPO轴促进红系祖细胞分化成熟