次级代谢产物埃博霉素和头孢菌素在产生菌中合成的研究生物工程专业论文.docxVIP

山东大学硕士学位论文目录 山东大学硕士学位论文 目录 摘要 I Abstract．．．．．．．．．．．．．． ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． ．．．．．．．． ．．．．．，．．．．．．．．． ．．．．． ．．．．．．．．．．．．III 第一章 前言 ．．1 1．1 抗生素生产现状 一1 1．1．1 抗生素及其生产简介 1 1．1．2 几种抗生素概述 2 1．1．2．1． 阿霉素 一2 1．1．2．2。 埃博霉素 一3 1．1．2．3． 头孢菌素 ．．4 1．2 埃博霉素发酵研究背景概述 ．．4 1．2．1 埃博霉素与粘细菌 4 1．2．2 提高埃博霉素发酵产量方法 5 l。2t2。1． 埃博霉素的异源表达 ．．5 1．2．2．2． 培养基及发酵方法优化 一6 1．2．2．3． 纤维堆囊菌的分散生长驯化 一6 1．3 去乙酰头孢菌素C研究背景概述 ．．7 1．3．1 去乙酰头孢菌素C的合成与调控 ．．7 1．3．2 丝状真菌转化方法概述 9 1．3．2．1．PEG／CaCl2介导的原生质体转化法 9 1．3．2．2． 基因枪法 一9 1．3．2．3． 农杆菌介导转化法 10 1．4 本论文主要研究内容 10 第二章 埃博霉素类化合物种类及产量的优化 13 2．1 材料与方法 13 2．1．1 实验菌株 ．13 2．1．2 培养基与实验试剂 ．14 2．1．3 实验仪器 ．14 万方数据 山东大学硕士学位论文2．1．4 山东大学硕士学位论文 2．1．4 埃博霉素发酵及检测 ．1 5 2．1．5 菌株质粒检测 ．16 2．1．5．1． 粘球菌落PCR 16 2。1。5．2。 粘球菌质粒提取 1 7 2．1．6 荧光定量PCR检测修饰酶表达量 18 2．1．6．1． 提取RNA 18 2．1．6．2．消除基因组 1 8 2．1．6．3． RNA反转录cDNA 19 2．1，6．4． 荧光定量PCR引物信息 1 9 2．2 结果与讨论 20 2．2．1 含有埃博霉素修饰酶基因的异源表达菌株质粒检测 ．20 2．2．1．1． 菌落PCR 20 2．2．1．2． 以提取质粒为模板扩增目的片段 20 2．2．2 修饰酶基因荧光定量PCR检测 21 2．2．3 埃博霉素修饰产物发酵检测 ．22 2．2．4 添加酵母浸粉的影响 ．22 2．2．4．1． 添加酵母浸粉对检测的影响 22 2．2．4．2． 添加酵母浸粉对产量的影响 23 2．2．5 CYE培养基发酵结果 25 2．2．6 添加甲基丙二酸对产量的影响 ．27 2．2．7 添加吲哚乙酸对产量的影响 ．28 2．2．8 添加物对纤维堆囊菌和粘球菌作用对比 ．29 2．2．9 油酸甲酯添加时问点对产量的影响 ．30 2．2．10 在24小时处不同油酸甲酯添加量对产量的影响 3l 2．2．1l 添加三油酸甘油酯对产量的影响 ．32 2．3 小结 弭 第三章 顶头孢霉遗传改造方法探索．． 卯 3．1 材料与方法 一 ” 3．1．1 实验菌株 ．37 万方数据 山东大学硕士学位论文3．1．2 山东大学硕士学位论文 3．1．2 培养基 ．37 3．1．3 实验试剂和常用试剂盒 ．38 3．1．4 实验仪器 ．39 3．1．5 敲除载体构建 ．40 3．1．5．1．敲除载体l构建 40 3．1．5．2． 敲除载体2构建 40 3．1．6 顶头孢霉菌丝培养 ．43 3．1．7 顶头孢霉原生质体的制备 ．43 3．1．8 顶头孢霉原生质体的转化和再生 ．44 3。1．9 大肠杆菌超级感受态制备 ．44 3．1．10 大肠杆菌转化 ．44 3．1．11 基因组提取 ．45 3．1．12 PCR验证hyg基因和cefG基因 45 3．1．13 发酵产物验证 ．46 3．1．13．1。转化子发酵 46 3．1．13．2．高效液相色谱发酵液检测 46 3．2 结果及讨论 47 3．2．1 敲除载体1检测 ．47 3．2．2 敲除载体2检测 ．48 3。2．3 顶头孢霉的培养 ．49 3．2．4 原生质体制备条件探索 ．5l 3．2．5 顶头孢霉原生质体的转化和再生 ．52 3．2．6 顶头孢霉转化子检测 ．54 3．3 小结 ．．54 总结与展望 ．57 致谢 ．59 参考文献 ．61 万方数据 山东大学硕士学位论文摘要 山东大学硕士学位论文 摘要 抗生素是与人们日常生活息息相关的药物，自发现以来挽救了无数人的生 命，一直活跃在临床治疗一线，受到广泛的重视。对抗生素的研究也在一直进步， 药品不断更新换代，以更好的应用于诊治患者。抗生素的生产关系到国计民生， 因此对抗生素生产方法的优化也就成为科学研究的重要领域。抗生素生产的研究 方向主要有两