通用蛋白裂解抽提试剂.PDFVIP

◆ 通用蛋白裂解抽提试剂//// PP11 PP11 ◆ 目录号 PPPP1111 ◆ 使用手册 ◆ 实验室使用，仅用于体外 通用蛋白裂解//抽提试剂// PP11 PP11 目录号：PPPP1111 目录编号 包装单位 50ml 50ml 5500mmll PP1101 PP1101 PPP 100ml 100ml 110000mmll PP1102 PP1102 PPP � � �� 产品介绍： 20mMTris(pH7.5) EDTA NaCl 本产品的主要成分为含有 、 、 等成份的缓冲液体系 中加入了特殊的非离子型去垢剂，以及sodium pyrophosphate 等数种蛋白磷酸酶抑制 剂，能裂解细胞并在非变性条件下释放胞浆蛋白和可溶性膜蛋白、核蛋白。同时维持 了原有的蛋白间相互作用并保留了蛋白的特性和功能，如抗原抗体结合或酶学活性，- 因此本试剂抽提得到的蛋白不仅适用于Westernblot，免疫沉淀，还适宜于进行蛋白活 性功能检测和免疫共沉淀。由于加入了多种磷酸酶抑制剂，尤其适宜于磷酸化蛋白的 免疫共沉淀或Westernblot 研究。此外有些对蛋白天然构象亲和力高的抗体或者只能识 别非变性抗原结合位点的抗体，这种情况应该使用本品在非变性条件下裂解细胞。 � 产品储存： 4℃避光 � � �� 注意事项： 1. 裂解得到的蛋白样品，由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford 法测定蛋白 浓度，可以选用本公司生产的BCA蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度。 2. 用户使用前需加入蛋白酶抑制剂如PMSF或者根据需要再加入leupeptin，aprotinin 等其它抑制剂。 3. 裂解蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。 -1- � � �� 操作步骤：（实验前请先阅读注意事项） 1. 对于培养细胞样品： 1) 取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。 2) PBS ( 对于贴壁细胞，去除培养液，用 、生理盐水或无血清培养液洗一遍 如果血清 ) 6 100-200 中的蛋白没有干扰，可以不洗。按照 孔板每孔细胞加入 微升裂解液的比 例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞 1-2秒后，细胞就会被裂解。 3) 对于悬浮细胞，离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加 入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解 后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必须分装成50-100万个细胞管，然/ 后再裂解。 4) 充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、 免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。 6 100 6 100 66