对苯二甲酸致膀胱损伤作用的研究药理学专业论文.docxVIP

—— —— 查童墨翌查芏堡主芏堡笙查 对苯二甲酸致膀胱损伤作用的研究 南京医科大学公共卫生学院 江苏省应用毒理学重点实验室 南京210029 博士生： 戴贵东 导 师： 王心如 教授 胡 刚 教授 指导小组 周建伟 教授 肖杭 教授 张淳文 教授 摘要 对苯二甲酸是目前世界上生产和使用最为广泛的化学物质之一，主要 用于合成纤维、树脂和胶片等。随着其需求量的日益增多，生产规模不 断扩大，对苯二甲酸职业接触人群的数量骤增。虽然TPA属非遗传毒性 化合物，但其对鱼类和藻类的毒性以及诱发大鼠膀胱结石、膀胱上皮增 生乃至膀胱癌的形成，引起人们对其安全性的广为关注。为此，本研究 在TPA90天皿良性大鼠染毒实验的基础上，观察并探讨了TPA、膀胱结 石和膀胱上皮的增生三者间的因果关系，以期为阐明TPA致膀胱损伤作 用的机制，确立其对人群危害作用提供科学依据。 南京医科大学博士学位论文第一部分 南京医科大学博士学位论文 第一部分 对苯二甲酸对膀胱损伤作用的机制研究 目的：本研究观察并探讨了TPA对90天皿陧性染毒大鼠膀胱的损伤 作用及其机制，以期为合理评价TPA的危害性提供线索。 方法：SD大鼠随机分为5组，饲以含0％、0．04％、0．2％、1％和5％ TPA的饲料，连续饲喂90天，收集血、尿和膀胱等组织与器官作进一步 分析与研究。 结果：TPA90天亚慢性毒性试验对大鼠体重及脑、心、肝、脾、肺、 ’肾和膀胱等各主要器官的脏器系数无影响。随着TPA染毒剂量的增加， 尿ca2-，Zn2。，Mg斗，Na+和K+含量升高；尿pH降低及1％和5％TPA染毒 组雄性大鼠24小时尿量增加。雌雄大鼠尿液中均观察到白色沉淀物，尤 以5％TPA染毒雄鼠最为明显。雄性大鼠血、尿AUG水平的升高与染毒 剂量呈剂量依赖性。5％TPA染毒组雄性大鼠共检出膀胱上皮细胞单纯或 非典型性增生14／52例，其中3例膀胱上皮增生不伴有结石的检出；该 剂量组雌鼠检出膀胱上皮单纯性增生1／23例，并有结石的检出。所有检 出膀胱结石和膀胱上皮细胞增殖的TPA染毒大鼠，尿液中均伴有以上白 色沉淀物的出现。 结论：TPA暴露后AUG相关尿白色沉淀物的形成是膀胱结石形成的 基础，并与膀胱上皮细胞的增殖有关，可作为判断TPA毒性损伤作用的 早期生物学标志物。 关键词：对苯二甲酸；SD大鼠；膀胱；结石；增生；沉淀物； alpha2u一球蛋白 第二部分 对苯二甲酸结石致大鼠膀胱上皮细胞增殖效应的机制 目的：膀胱癌是泌尿外科常见的恶性肿瘤之一，由于复发率较高，死 亡率逐年上升。肿瘤的发生与细胞周期调控通路密切相关，TPA致大鼠 南京医科大学博士学位论文膀胱结石模型为研究慢性损伤致膀胱上皮增生及细胞增殖效应提供了S- 南京医科大学博士学位论文 膀胱结石模型为研究慢性损伤致膀胱上皮增生及细胞增殖效应提供了S- 具。 方法：刚断乳SD大鼠随机分为6组，分别饲以正常及含5％TPA． 5％TPA+4％NaHc03，4％NaHC03，5％TPA+0．02％氢氯噻嗪和o。02％氢氯 噻嗪的饲料。90天后收集膀胱标本进行病理学分析，以及p16hH“，cyclin Dl，CDK4，EGFr,cyclin E和相关增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组织化 学检测。 结果：TPA染毒组检出膀胱结石21／52和膀胱上皮增生14／52。PCNA 阳性表达见于增殖膀胱上皮的各层。cyclin D1，CDK4，EGFr的过表达与 相应的损伤有关，p16“1№表达的缺失见于高度增生的膀胱上皮，尤其是 腔内含有较多结石的膀胱。此外，cyclin E未检出阳性表达。 结论：结石等慢性损伤所致膀胱上皮细胞增殖效应的发生与p16m¨8． cyc|in Dl／CDK4通路的功能失调和EGFr的异常表达有关。 关键词：对苯二甲酸；SD大鼠；膀胱增生；细胞周期蛋白；钙石小体 免疫组化 第三部分 对苯二甲酸代谢研究 目的：探讨机体能否代谢TPA，TPA及其可能代谢产物的DNA损伤 作用，以及TPA染毒后与膀胱癌相关代谢酶的改变，为TPA的非结石致 膀胱损伤作用寻找直接和间接的证据。 方法：采用s typhimurium NM2009测试菌株检测TPA分别与苯巴比 妥钠、3一甲基胆蒽及禁食诱导和非诱导肝微粒体共孵育后的诱变活性； HPLC测定肝微粒体体外孵育系统中，不同温9I孚条件下TPA量的变化； RT—PCR法观察比较TPA 90天染毒大鼠膀胱癌相关代谢酶CYP481在 肝、肾和膀胱组织中的表达。 结果：TPA(O．025～0．1mmol·L。1)与诱导和非诱导肝微粒共9阵育后， NM2009均耒捡出其具有诱变活性；肝微粒体体外孵育体系中，不同TPA 南京医科大学博士学位论文浓度(12．5～200“tool+L。)以及不同的孵育时间(15