肝衰竭细胞治疗的基础研究内科学传染病专业论文.docxVIP

上海第二医科大学博士学位论文表达及向成熟肝细胞的分化能力。结果：10、15、20mg／kg三种剂量2-AAF均 上海第二医科大学博士学位论文 表达及向成熟肝细胞的分化能力。结果：10、15、20mg／kg三种剂量2-AAF均 可成功建立卵圆细胞增殖模型，卵圆细胞增殖于第8d较明显，至第11d达高峰， 第14d有所减少。卵圆细胞胞核Brdu染色阳性，其除表达卵圆细胞特异性抗原 OV6外，尚表达肝细胞标记白蛋白及胆管细胞标记CKl9。胚胎期肝细胞抗原 AFP、连接蛋白43在卵圆细胞中亦有高表达，同时还表达造血干细胞标记C—kit。 以MACS纯化的C．kit阳性卵圆细胞，90％以上为OV6阳性，大部分AFP阳性。 C-kit阳性细胞在体外增殖能力较强，能形成集落样生长，具有向胆管细胞及肝 细胞分化的双向分化潜能。经脾髓移植后，部分细胞在脾脏内向肝细胞分化，部 分迁移至肝脏组织，参与肝脏的重建。肝前体细胞在体外培养时显示克隆样生长 的特性。促肝细胞生长因子(HGF)、表皮生长因子(EGF)能促进肝前体细胞 的增殖，使DNA合成加速，并促进干细胞集落的形成及角蛋白19、白蛋白及G 一6一P的表达。o转化生长因子(TGF—a)对肝前体细胞的促增殖作用较弱。 B一转化生长因子(TGF—D)对肝前体细胞的增殖起到抑制作用。细胞基质成分 I型胶原、Ⅳ型胶原、层粘连蛋白能促进肝干细胞集落的形成，而纤维连接蛋白 的作用较弱。结论：2一AAF剂量为10～20mg／kg时可获得满意的大鼠卵圆细胞 增殖模型，增生的卵圆细胞为具有双向分化潜能的肝脏干细胞／前体细胞，利用 C—kit标记通过MACS可纯化这种肝干细胞／前体细胞。C-kit阳性细胞在体内能 向肝细胞分化，参与肝脏的重建。生长因子及细胞外基质对肝前体细胞的增殖、 分化起着重要的调节作用。 关键词：肝细胞肝脏干细胞生长因子 上海第二医科大学博士学位论文Experimental 上海第二医科大学博士学位论文 Experimental study on heaptic cell therapy Abstract Part I：Morphology,viability and function of suckling pig hepatocytes in spheroid culture and cryopreserVation for bioartificial fiver system Objective Hepatic failure is a serious clinical syndrome．A possible solution to this problem is bioartificial liver system．In bioartificial liver system preparation，isolation and culture of pig hepatocytes in large scale is needed．This study aimed to evaluate the changes in morphology,viability and fimcfion of pig hepatocyte during spheroid culture and cryopreservation．Methods Hepatocyte isolation was performed by modified two—step half in situ collagenase perfusion via portal vein． Morphology,viability,protein and urea synthesis were compared among monolayer culture，speroid culture and cryopreservation．Results The total amount of hepatocytesisolatedfrom apigwas 3．1±1．5(×1010)andtheviabilitywasmorethan 95％．Function of hepatocytes cultured in medium supplemented with dexamethasone， insulin，HGF,EGF,FBS was stable for about two weeks．The spheroid culture was superior to monolayer culture in functional aspect of hepatocyte．After cryopreservation，the via