稻瘟菌诱导性水稻蛋白激酶基因的cdna克隆及其功能研究植物病理学专业论文.docxVIP

摘 摘 要 ／ {细胞在生长、分化和感应各种环境因子刺激时，蛋白质的可逆磷酸化是一系列信号感 受和传导过程中的重要反应。近年的研究表明，催化蛋白质磷酸化反应的蛋白激酶在植物 与病原物互作初期的信号识别与转导以及随后的防御反应调控等阶段均扮演重要的角色。 克隆病原菌诱导表达的蛋白激酶基因，研究它们和植物抗病的关系以及在抗病中所起的作 用一方面对于阐明植物抗病的分子机制具有重要作用，另一方面，也可以为植物抗病基因 工程提供必需的材料。 稻瘟病是水稻上最主要的病害之一，也是研究植物与病原物相互作用分子机理的模式 、1厂 系统之一J本研究以水稻稻瘟病为体系，以阐明稻瘟菌诱导的蛋白激酶在水稻抗稻瘟菌中 所起的作用为目标，首先通过反向northern确认了非亲和性稻瘟菌侵染稻叶中分离的一个 差异显示cDNA片断s2的抗病诱导性，然后以它为探针，筛选抗病稻叶的cDNA文库， ， 获得了与探针相对应的水稻cDNA克隆Oswak2。幻sw口船基因的cDNA全长为2457bp，其 L 推定的产物具有典型的植物受体类似蛋白激酶的特征，由胞外域、跨膜域和胞内蛋白激酶 域三部分组成。同拟南芥中的细胞壁相联蛋白激酶WAK2同源性最高，二者氨基酸序列一 致性为27．6％。Southem杂交表明：该基因在水稻基因组中有2．3个类似物。不同生物和 非生物刺激下的northern分析表明：该基因的转录激活受稻瘟菌侵染、机械伤害、SA、 ，1一 MeJA和紫外线照射的诱导，ABA不能诱导该基因的表达。分析这些不同因素刺激下该基 ／ 因的诱导表达时间动态初步推断该基因和水稻抗稻瘟菌有关。 为进一步搞清Oswak2及其它两个稻瘟菌侵染诱导的Osepkl和Oseptil基因在水稻抗 稻瘟菌中的作用，构建了能形成这几个基因sense转录物、antisense转录物和mRNA duplex结构转录物的植物转化双元载体，并通过农杆菌介导转化了水稻，共获得了372株 转基因植株。采用稻叶离体接种的方法对这些转基因水稻同时进行了稻瘟菌亲和性和非亲 ， 和性小种的接种a瞄果表明：3个基因的能形成sense转录物的载体转化的水稻，接种亲 和性稻瘟菌中后都有从原来的感病变成抗病的：转化能形成mRNA duplex结构转录物的载 体的水稻，接种非亲和性稻瘟菌后，也都有从原来的抗病变成感病的。通过PCR检测证 明了目标基因已转入这些抗感病发生变化的水稻。要进一步明确它们在水稻抗稻瘟菌的作 V 、，用，还需分析这些抗感病发生变化的转基因水稻中目标蛋白激酶基因的表达情况，， 、， 用，还需分析这些抗感病发生变化的转基因水稻中目标蛋白激酶基因的表达情况，， 另外，为了研究水稻抗稻瘟菌的抗病分子机制，还利用酵母双杂交体系，对OseptiI 和Oswak2的作用蛋白进行了研究。通过筛选抗病稻叶的酵母表达文库，初步得到了和 Oswak2互作的阳性克隆7个，和Oseptil互作的阳性克隆129个。 关键词： 稻瘟菌，eDNA克隆， 蛋白激酶， 功能 V ABSTRACTPlants ABSTRACT Plants have evolved a large array of mechanisms responsive to various extemal stimuli， protein phosphorylation is one ofthe most important reactions in signal transduction in response to these changes．In recent years，it was shown that protein kinase catalyzing the protein phosphorylation were important for pathogen perception and the downstreaming defense responses．So．cloning the 11ew plant protein kinase induced by pathogen infection and study the roles they played in disease resistance are favorable to clarify the mechanism underlying plant-pathogen interaction，On the other hand，such studies may provide suitable genes required for engineer disease resistance in crops． Magnaporthe grtsea is the causal ag