工频磁场细胞信号转导机制及噪声磁场干预作用研究劳动卫生与环境卫生学专业论文.docxVIP

浙江大学博士学位论文缩略语 浙江大学博士学位论文 缩略语 (Abbreviation) ECL Enhanced chemiluminescence EGF Epithelium growth factor ELF．EMF Extremely low·frequency electromagnetic field ERK Extracellular signal-regnlated kinase FITC Fluorescein isothiocyanate GJIC Gapjunctional intercellular communication HRP HorSemdish peroxidase JNK C．．Jun N．．terminal kinase MAPK Mitogen-activated protein kinase MEKK Mitogen—activated protein kinase kinase kinase MF Magnetic field NP．40 Nonylphenyl—polyethylene glycol，Nonidet P40 P38MAPK P38 mitogen·aetivted protein kinase PBS Phosphate buffer saline PKC Protein kinase C PMSF Phenylmethylsulfonyl fluoride PI Propidium iodide SAPK Stress—activated protein kinase SDS Sodium dodecyl sulfate SEKl SAPK，ERK kinase—l TBS Tris—bu虢r saline TEMED N，N，N’，N-tetramethylethylenediamine TNF Tumor necrosis fhc“)r 摘 摘 要 浙江大学博士学位论文工频磁场细胞信号转导机制及噪声磁场干预作用研究 浙江大学博士学位论文 工频磁场细胞信号转导机制及噪声磁场干预作用研究 浙江大学医学院 劳动卫生与环境卫生学 博士研究生 孙文均 导 师 姜槐余应年教授 摘要 电气化是人类文明进程的里程碑。然而越来越多的研究提示，极低频电磁场 可引起有害的生物效应。特别是有研究报道，由高压输电线等产生的工频电磁场 可增加儿童白血病，神经系统肿瘤及淋巴瘤发病的危险率。为了揭示工频磁场生 物效应的机制，尤其是与肿瘤发生发展的关系，人们开展了较为广泛的体内及体 外的实验研究，涉及到各种生物酶类(ODC、琥珀酸脱氯酶、PKC等)、原癌基 因(c—mye、c—fos等)、细胞间缝隙连接及蛋白合成等方面。然而极低频电磁场 生物效应的机制仍不明确。 环境中极低频电磁场通常因能量较低而难以直接与生物大分子作用或导致 DNA损伤，引发突变、畸变及断裂等效应。因此一般认为电磁场可能通过作用 于细胞膜上业已存在的信号转导途径，将物理信号转化成生物信号，进而经过信 号转导及生物级联放大，最终产生生物效应。对极低频电磁场信号转导过程的研 究，有利于揭示其生物效应的机制。相关的研究表明，SAPK途径及P38 MAPK 途径是哺乳类动物细胞内普遍存在，并介导物理性应激的两条重要途径，它们通 过蛋白质的级联磷酸化过程来进行信号的转导。极低频电磁场是环境中的一种物 理应激因子，因此推测极低频电磁场的生物效应与该途径间存在一定的联系。所 以本实验以蛋白质酪氨酸磷酸化为起点，研究极低频磁场对SAPK途径及P38 MAPK途径的影响。细胞膜是电磁场信号的可能耦合位点，相关研究也证实了 细胞膜受体在细胞转导物理性应激因子中的作用。因此本文又进一步探索了极低 频磁场对细胞膜受体聚簇的作用。 近年来，Litovitz等提出了电磁场的时空相干理论：认为规则电磁场是相干 场，可诱导生物体产生效应，而噪声磁场为非相干场，可以干预前者的生物效应。 并以系列的实验验证了该理论。然丽，由于验证该理论的实验研究所用的磁场强 ．2． 浙江大学博士学位论文度很低(微特斯拉级)，其本身所诱导的生物学效应存在不确定性，科学界对其 浙江大学博士学位论文 度很低(微特斯拉级)，其本身所诱导的生物学效应存在不确定性，科学界对其 结果尚存在争论，因此，噪声磁场的干预效应一直没有被广泛接受。我们认为， 从理论上分析其效应可能存在。故本文使用上述经反复验证的、强度0．4 mT、 具有明确生物效应的工频磁场及相同强度的噪声磁场，以SAPK磷酸化及细胞膜 EGF与TNF受体聚簇程度为研究指标，探索了噪声磁场及由噪声磁场与工频磁 场叠加产生的复合磁场的生物效应。 1．I频磁场对细胞蛋白质酪氨酸磷酸化的影响 蛋白质级联磷酸化是细胞内信号转导