定向分析毒理学方法的建立优化及其在环境毒理学的初步应用环境科学专业论文.docxVIP

分类号： 分类号： X132 单位代码： 10335 密 级： 学 号：洳≥：j-．-4 硕士学位论文 ⑧ 中文论文题目 英文论文题目Development,Optimization and Preliminary— Application of Targeted Analytical ToxicoloKy． i塾星望∑i!Q坠坐星望!垒!!Q茎i￡Q!QgY 论文提交El期 2Q!量生鱼月兰旦 万方数据 燮㈣矧堂 燮㈣矧堂 警 ⑧ 论文作者签名： 多、教 指导教师签名： 论文评阅人1： 登超!副煎拯3浙江三些太堂 评阅人2： 篮姻3盈塞虽3主国型堂瞳撼立巫蕉盟壅压 评阅人3： 评阅人4： 评阅人5： 答辩委员会主席： 童裳俭3熬撞3逝江太堂巫埴生资退堂医 委员1： 刘堡3副熬撞3浙江太堂巫埴盏资遮堂瞳 委员2： 苤选坚3副熬拯!逝江太堂巫撞鱼资退堂医 委员3： 委员4： 委员5： 答辩日期： 2Q15生鱼月2旦 万方数据 浙江大学研究生学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 浙江大学研究生学位论文独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发 表或撰写过的研究成果，也不包含为获得逝垄盘堂或其他教育机构的学位或 证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文 中作了明确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名：彦般签字目期：细f，年6月弓日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解澎婆太堂有权保留并向国家有关部门或机 构送交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权逝婆太堂 可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影 印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。 (保密的学位论文在解密后适用本授权书) 锄鲐；√乞睁 学位论文作者签名： 彩苏 签字目期：矽心年占月弓曰 签字日期：工。f一『年∥月3日 学位论文作者毕业后去向： 工作单位： 电话： 通讯地址： 邮编： 万方数据 基金资助本研究受国家自然科学基金(No．21320102007和No， 基金资助 本研究受国家自然科学基金(No．21320102007和No， 浙江省自然科学基金(No．LY 及 浙江大学空气污染与健康研究中心(APS2004001) 资助，特此致谢! 万方数据 浙江大学硕士学位论文 浙江大学硕士学位论文 摘要 摘要 毒理学，尤其是环境毒理学，其主要研究任务是探索蓄积于生物体内的污染物及其对 生物体的后续影响。在大多数环境毒理学研究中，建立生物体内污染物暴露水平与生物／ 分子响应之间的关系是最重要的目标之一。为实现这一目标，人们通常要测定污染物及其 响应(常定义为生物标志物)的浓度水平。但在大多数研究中，二者是分开进行测定的， 因而需要耗费大量的时间、金钱和劳力。此外，某些生物标志物分析方法的局限性还限制 了对生物标志物的测定。如用于测定蛋白质生物标志物的免疫分析方法，严重依赖于相应 的抗体。 定向蛋白组学的发展使得在同一样品中实现对污染物浓度及蛋白生物标志物浓度的 同时测定成为了可能。定向蛋白组学是在近些年发展起来的一种对样品中感兴趣的一组目 标蛋白进行定量分析的方法。在定向蛋白组学的实验中，预先被选定的蛋白首先被酶解成 多肽，再被LC．MS／MS检测。这种方法在蛋白分析中具有高灵敏度、高定量准确度及高重 现性的特点。在定向蛋白质组学中，预选蛋白质酶解所形成的目标多肽通常用LC．MS／MS (尤其是三重四级杆)进行定量分析，而许多环境污染物最理想的定量方法也是用 LC—MS／MS。因此，利用LC．MS／MS对这两类指标进行同时测定在理论上是可行的。但是， 目前尚未见到这方面的研究报道。 基于定向蛋白组学方法，我们建立了一种新的方法并将之命名为定向分析毒理学 (targeted analytical toxicology，TAT)。该方法利用UPLC／ESI-MS／MS x,-j生物体内的污染 物和蛋白生物标志物进行同时测定。我们首先将该方法成功应用于暴露于17c【一雌二醇 (EE2)的成年雄性斑马鱼体内EE2及其诱导的卵黄蛋白原(VTG)的同时定量分析。实验 结果表明，EE2浓度和VTG浓度之间有显著的正相关性(p0．05)。且基于生物体内污染 物的内暴露浓度的剂量一效应关系图也比基于污染物的名义暴露浓度的剂量一效应关系图 更具有可靠性。 随后我们对TAT方法进行了优化。实验首先通过设计含有可被胰酶消化位点的目标长 肽来示踪胰酶的消化效率，结果表明不同长度的含有