肺泡上皮β肾上腺素能受体活性对na通道的影响细胞生物学专业论文.docxVIP

fIII}l fIII}l II I I III I{}111{III 、t 1 926728 肺泡上皮p．肾上腺素能受体活性对Na+通道的影响 答辩委员会成员签字：——学位善喜蠢篇昱茎i竺牲指导教师签字：互塑缢一—— 垒2垒班 一』枷吆么蕴 独创声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 独创声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其 他人已经发表或撰写过的研究成果， 也不包含未获得 (逵!麴逡直基丝壶墨鳖型重明数：奎拦亘窒2或其他教育机构的学位或证书使 用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明 确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名：王确 签字日期：≯口，1年5月多J日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，并同意以下 事项： 1、学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许 论文被查阅和借阅。 2、学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以 采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权清华大学“中 国学术期TO(光盘版)电子杂志社”用于出版和编入CNKI《中国知识资源总库》， 授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》。 (保密的学位论文在解密后适用本授权书) 学位论文作者签名： 新粹姗导师签字： 1脚爿影卜 ≯， 乙／v 王蔺 签字日期：l,otl年s月≥1日 签字日期：伽lf年歹月；／日 肺泡上皮p一肾上腺素能受体活性对Na+通道的影响 肺泡上皮p一肾上腺素能受体活性对Na+通道的影响 摘要 肺泡上皮组织在呼吸系统中除气体交换外还具有维持肺泡内液体环境的重 要功能。研究认为肺泡内液体的清除主要依赖肺泡上皮钠通道介导的Na+离子转 运。目前的临床上使用D2．肾上腺素能受体激动剂能够有效地消退肺泡性水肿， 但对于B．受体激动剂影响钠、水转运的细胞机制方面，仍存有不少疑问有待于探 索。 本研究将D一肾上腺素能受体激动剂isoproteremol(异丙肾上腺素)和抑制 剂propranolol(普萘洛尔)以及a·肾上腺素能受体抑制剂phentolamine(酚妥 拉明)，作用于人肺泡腺癌细胞系A549和人气道上皮细胞系16HBE，利用RT-PCR 的方法检测其D受体以及上皮钠通道(ENaC)a、13和1f三个亚基mRNA表达的 变化。实验结果表明，B-受体激动剂isoproteremol能够增强肺泡细胞A549的 13受体和ENaC一13和一丫两个亚基mRNA的表达，且mRNA表达随时间逐渐增 强，而对气道细胞16HBE的ENaC—p和吖‘两个亚基mRNA的表达则呈现抑 制作用。p·受体抑制剂Propranolol可以降低肺泡A549、气道1 6HBE细胞 ENaC一13和吖两个亚基的表达。表明13受体激动剂和抑制剂是通过改变p受 体的表达水平对来调控细胞ENaC的表达。(It。受体抑制剂Phentolamine对两个 细胞系的作用与isoproteremol类似，增强A549细胞的ENaC．p、-^r的表达， 而降低16HBE的ENaC一13、吖的表达。我们还将A549和16HBE两个细胞 系在通透滤膜上培养，探索胶原涂层、接种密度和培养时间等条件，培养成 了紧密的细胞单层。采用电生理短路电流技术对A549、16HBE细胞单层的 离子通道转运情况进行初步研究。肾上腺素adrenaline能够引起16HBE细胞 短路电流的上升，Cl‘通道激动剂forskolin和ATP也能引起跨上皮电流，证 明存在Na+、CI。通道介导的离子转运。 本文通过研究受体激动剂／抑制剂药物对肺泡上皮p．受体和Na+通道 mRNA表达的影响，证明了13受体激动剂和抑制剂能够通过影响B．受体的表 达来调控ENaC的表达，实现对肺泡液体的清除能力的调控。实验结果还显 示，p．肾上腺素受体激动剂刺激会在肺泡和气道两类上皮细胞引起截然不同 示，p．肾上腺素受体激动剂刺激会在肺泡和气道两类上皮细胞引起截然不同 的Na+通道表达结果，提示不同细胞类型的离子转运功能上的明显区别。本 实验初步建立的A549和16HBE细胞的滤膜培养方法，可为今后的上皮离子 转运细胞和分子机制的研究提供实验基础。 关键词：呼吸道；肺泡上皮细胞；离子转运；p2一肾上腺素能受体 The The influence of p．adrenoceptor activity on Na+channel in alveolar epithelium Abstract Besides of the gas e