免疫学和分子生物学技术在猪传染性胃肠炎诊断中的-中国兽药杂志.PDFVIP

·５６· 中国兽药杂志 ２０１６，５０（２）：５６～６２／谢立兰，等　 免疫学和分子生物学技术 在猪传染性胃肠炎诊断中的应用进展 １ ２ １ １ ２ ２ 谢立兰 ，方六荣 ，方华为 ，张军林 ，安 康 ，肖少波 （１．武汉生物工程学院应用生物技术研究中心，武汉４３０４１５；２．华中农业大学 农业微生物学国家重点实验室，武汉４３００７０） ［收稿日期］２０１５－１２－２１　［文献标识码］Ａ　［文章编号］１００２－１２８０（２０１６）０２－００５６－０７　［中图分类号］Ｓ８５２．６５ ［摘　要］　近年来，与猪传染性胃肠炎（ＴＧＥ）类似的肠道传染病日益增多，以病理组织学观察和临 床症状为主要指标的传统方法已不能进行准确的判断，众多学者建立了大量的免疫学和分子生物 学新方法。文章就主要免疫学技术（病毒中和实验、酶联免疫吸附试验、胶体金技术）和分子生物学 技术（反转录－聚合酶链式反应、反转录环介导等温扩增技术、基于纳米颗粒和ＤＮＡ探针技术的超 灵敏ＰＣＲ方法）在ＴＧＥ诊断中的最新应用研究进行了综述，以期为进一步防控该病提供参考。 ［关键词］　猪传染性胃肠炎；免疫学技术；分子生物学技术；诊断 基金项目：国家自然科学基金 作者简介：谢立兰，讲师，从事动物病毒分子生物学与免疫学研究。 通讯作者：肖少波。Ｅ－ｍａｉｌ：ｖｅｔ＠ｍａｉｌ．ｈｚａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ 檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶 液一般都采用静置培养，因而表２接入菌数所占比 获得培养菌体稳定期。在此参数下，初步完成了培 例完全能覆盖兽用生物制品种子液常用的１％ ～ 养基的比较筛选和应用评价。上述工作的完成，为 ［３］ ３％接菌量 ，表明按此标准的接菌量对整个振荡 我国兽用细菌类疫苗合成培养基的筛选研究提供 培养中培养菌数影响不大。 了经验借鉴，从而进一步为实现兽用细菌类疫苗高 由生长曲线获得的细菌培养参数，在此参数下 密度培养工艺化改造奠定基础。 可得出研制的合成培养基批次间相对稳定，培养菌 参考文献： 数优于普通肉汤。由于牛肉汤难以质量标准化，因 ［１］　刘芹防，崔尚金．猪沙门氏菌病病原学、流行病学、诊断及防 ［３－４］ 治进展［Ｊ］．猪业科学，２００９，１２：２４－２８． 此３批普通肉汤培养菌数差异大 。同时运用合 ［２］　陆承平．兽医微生物学（第四版）［Ｍ］．北京：中国农业出版 成培养基培养的菌体对小鼠的安全检验及对家兔的 社，２００７：１０７－１１３． ［３］ 免疫攻毒结果与普通肉汤一致，符合《规程》 中“仔 ［３］　农业部兽用生物制品规程委员会．中华人民共和国兽用生物 猪副伤寒活疫苗制造及检验规程”的要求。另外合 制品规程（二版）［Ｓ］． 成培养基保存２８ｄ，其培养菌数与当天新配制培养 ［４］　陈天寿．微生物培养基的制造与应用［Ｍ］．北京：中国农业出 基一致。因此，初步试验表明，研制的合成培养基质 版社，１９９５：６－１８１． 量稳定，培养菌数高，而且不改变菌体的安全性及免 ［５］　张培德，夏 晴，陈石根．一种适合于溶葡球菌酶发酵生产和 分离纯化的半合成培养基的建立［Ｊ］．复旦学报（自然科学 疫原性，可替代普通肉汤。当然，合成培养基在发酵