动物组织胍盐.PPT

* 胍盐、β-巯基乙醇 裂解细胞灭活RNase RNA在高盐低pH值条件下与硅胶膜结合 RW1除去蛋白残留 DNase I去除基因组污染 RW除去盐离子 RNA在低盐高PH条件下被洗脱 用经DEPC处理过的水或专门的缓冲液洗脱或溶解RNA 裂解 结合 漂洗 洗脱 RNAprep pure试剂盒提取——动物组织 试验材料：大鼠肝脏/10mg 实验方法： TIANGEN公司 RNAprep pure Kit A公司某柱式RNA提取试剂盒 试验结果： 得率：RNAprep pure 得率比A公司产品高15％左右 高纯度：纯度较高，且无盐份残留 TIANGEN A公司 TIANGEN A公司 M TIANGEN A RNAprep pure试剂盒提取——实验举例 裂解 结合 漂洗 洗脱 控制提取样品量 防止堵柱或漏柱 盐离子去除 得率控制 RNAprep pure试剂盒提取——注意事项 RNA相关知识及提取方法原理 RNA提取流程 特殊组织RNA的提取 RNA的评价、鉴定与保护 TIANGEN公司RNA提取产品选择指南 一些特殊组织的RNA提取 纤维组织 蛋白/脂肪含量高组织 核酸/RNase含量高组织 植物组织/真菌组织 彻底破碎 多次氯仿抽提 减少处理量，多次氯仿抽提 多次氯仿抽提，特殊试剂 RNA相关知识及提取方法原理 RNA提取流程 特殊组织RNA的提取 RNA的评价、鉴定与保护 TIANGEN公司RNA提取产品选择指南 RNA的评价与鉴定 纯度（ OD260 /OD280 ）： 紫外分光光度计进行测量（选择正确的稀释倍数，确保OD260 值在0.1~1.0之间，通常离心柱法稀释10倍左右；溶液裂解法稀释40－50倍） OD260 /OD280 1.9 说明有蛋白污染 OD260 /OD280 ＝ 1.9 ～2.1说明纯度很好 OD260 /OD280 2.1说明有部分降解 得率 紫外分光光度计进行测量； Yield＝ OD260×稀释倍数×40ng/ul 电泳检测 1％琼脂糖，6V/cm，15min，上样1～3 ul M 1 2 M 1 2 DNA残留 蛋白残留 RNA的保护－－RNA的不稳定性 内因：核糖残基的2’和3’位置带有羟基，易被水解 外因：内源、外源RNA酶含量丰富，加热后仍能够正确折叠恢复活性，不易失活 RNA的保护－－常用的RNA酶抑制剂 焦碳酸二乙酯（DEPC） 异硫氰酸胍 RNasin 氧钒核糖核苷复合物 SDS、尿素、硅藻土等 RNA的保护－－提取前的保护 材料样品中的RNA保护 RNA提取工作区RNase的清除 实验耗材，器皿的RNase清除 塑料器皿可用0.1%DEPC水浸泡4-10小时，再灭菌 玻璃器皿可在180℃烘烤4小时 塑料制品和枪头避免交叉污染 组织破碎 细胞裂解 实验人员 适当的破碎方法 适量的裂解液 正确的操作和防护措施 RNA的保护－－提取过程中的保护 保存过程 RNAsafe 后续实验 RNasin RNA的保护－－提取后的保护 RNA相关知识及提取方法原理 RNA提取流程 特殊组织RNA的提取 RNA的评价、鉴定与保护 TIANGEN公司RNA提取产品选择指南 TIANGEN公司RNA提取试剂/盒 硅胶膜吸附法 沉淀法 DP419 RNAsimple总RNA 提取 试剂盒 DP315 TIANamp病毒DNA/RNA提取试剂盒 DP405 TRNzol 总RNA提取试剂 DP421 TRNzol-A＋总RNA提取试剂 DP407 RNAplant植物总RNA提取试剂 RNAprep pure 系列试剂盒 DP430 RNAprep pure培养细胞/细菌总RNA提取试剂盒 DP431 RNAprep pure 动物组织总RNA提取 试剂盒 DP432 RNAprep pure 植物总RNA 提取试剂盒 DP433 RNAprep pure 血液总RNA 提取试剂盒 DP420 RNAprep pure 微量总RNA 提取试剂盒 TRNzol－A＋ 总RNA提取试剂 RNAprep pure 总RNA提取试剂盒 1 样品预处理方式相同 2 裂解原理不同 3 RNA纯化原理不同： TRNzol-A＋：有机溶剂抽提，异丙醇沉淀 RNAprep pure：硅基质吸附膜分离纯化 分析比较 方法 提取材料 毒性