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温州医学院硕士学位论文百里醌治疗结肠癌的实验研究 温州医学院硕士学位论文 百里醌治疗结肠癌的实验研究 中文摘要 目的 观察百里醌(Thymoquinone)对体外人结肠癌细胞株SW480增殖和凋亡及 体内生长的影响，并探讨其可能机制。 方法 1、在体外，将人结肠癌SW480细胞暴露于不同浓度百里醌中，然后分别 用光学显微镜和荧光显微镜观察细胞形态学变化； 2、药物作用SW480细胞后，利用CCK．8法和流式细胞术分别检测药物对 细胞的增殖和凋亡的影响； 3、不同浓度百里醌作用SW480细胞后，Western blotting检测细胞中Bcl．2 和Survivin蛋白的表达。 4、在体内，建立裸鼠结肠癌皮下移植瘤模型，分成2组，分别灌胃给予溶 媒和百里醌治疗，实验结束后分离裸鼠皮下肿瘤称重并计算肿瘤生长抑制率； 免疫组化法检测各组肿瘤组织中Ki一67、Bcl．2和Survivin的表达。 结果 1、在体外，百里醌作用后的SW480细胞在光学显微镜和荧光显微镜下呈 现典型的凋亡表现(图1)。 2、、不同浓度百里醌(20 la tool·L～、40 la mol·L一、8 0 la tool·L。1和160 la mol·L。1)作用SW480细胞24 h后，细胞存活率分别为85％、76％、57％和 35％，各用药组细胞存活率均明显低于对照组(P0．05)。80 1．t tool·L-1百里醌 分别作用SW480细胞12 h和24 h后，分别诱导(7．8±0．5)％和(15．6±0．7) ％的SW480细胞发生早期凋亡凋亡，显著高于对照组细胞凋亡率(0．9～2．1)％ (尸0．05)(图2)。 3、与对照组相比较，百里醌可显著下调Bcl．2和Survivin在SW480细胞 中的表达(尸0．05)，呈浓度依赖性。 4、实验第49天处死动物后，仔细剥离皮下肿瘤并称重，对照组肿瘤平均 重量为(O．95+0．33)g；实验组肿瘤平均重量为(0．42±0．11)g，抑瘤率为55．79 ％，实验组瘤重与对照组瘤重相比较，有统计学差异(P0．05)。 结论 1、百里醌在体外可抑制SW480细胞增殖，并显著诱导细胞凋亡，且这种 抗肿瘤生长作用在体内也同样可发挥效应； 2、此作用机制可能与下调结肠癌中NF—KB调控蛋白Bcl一2和Survivin的表 温州医学院硕士学位论文达有关。 温州医学院硕士学位论文 达有关。 关键词：结肠癌；百里醌；凋亡；Bcl．2；Survivin -3． 温州医学院硕士学位论文An 温州医学院硕士学位论文 An Experimental Study on Inhibition E仃ect of Thymoquinone on Human Colon Cancer in vitro and in vivo Abstract objective To investigate the effect and the mechanism of thymoquinone in the growth inhibition of human colon cancer in vitro and in vivo Methods After human colon cancer SW480 cells were treated with different concentrations of thymoquinone，cell morphous and apoptosis were measured with light microscope，fluorescence microscope，CCK-8 assay and flow cytometric analysis．Westem blotting was used to detect the protein expression of Bcl-2 and Survivin in SW480 cells．Western blotting was used to detect the protein expression of Bel一2 and Survivin in SW480 cells．SW480 cells were injected subcutaneously into nude mice to establish liver xenograft tumors；the tumor growth inhibition rate was calculated after the mice were sacrificed．Immunohistochemistry was used to detect the positive expression ofKi-67，