臭腑血清蛋白和六种组织乳酸脱氢.pdfVIP

维普资讯 ●羹掌报1991，11(2)：126—130 Ther~olpgtca 鲤 臭腑血清蛋白和六种组织乳酸脱氢 酶同工酶的研究 石斌山．诸葛阳 (杭’fl大学生糖幕) ● 祷 耍 ● 本实验对臭簟 的血清蛋 白及心肌、骨髂肌、 肾脏 、脾 脏、肝脏 ，睾 丸6种 组 织器 官 的乳酸脱氢酶 (LDH)同工酶进行了聚丙烯酰胺凝胶盘状 电泳的分析研究。臭嗣血清蛋 白存 在15—17条带。各组织的LDH同工酶均 由5条带构成，其中~ ,LDH·1、LDH一2和肾脏LDH 一 1各出现 1条亚带。 美■饵 臭■}聚丙烯酰胺凝胶盘 电泳，乳酸脱氢酶同工酶；血清蛋白 目前，应用电泳技术在蛋白质水平上研究物种的分类地位和进化关系越来越受到人 们的重视。血清蛋 白和LDH同工酶，都具有物种的稳定性和特异性，是用于探讨生物 分类和进化的较好的生化指标。这方面的工作国内外报道较多(Markert，1965，Wils— oh等，1964p周虞灿等，1981，1988p赵小凡等，1986~王宗 等，1988，刘国富等， 1985，1988~马菜龄等，1989)。但食虫差皇鲔(S=nc=sm“一nⅡsmⅡrf )的血清蛋白 及同工酶的研究则未见报道。本文对臭的进行了 血清蛋 白及 6种组织的LDH同工酶的 聚丙烯酰胺 凝胶盘 电泳分析，为在分子水平上进一步探讨臭的的分类地位、进化关系和 种 内地理生态型提供实验资料 。 材 料 和 方 法 ● 实验用臭的 8只，均捕 自浙江肃山县瓜沥，体重30～60克的雄性成年个体。重复实 验 8(只)次。 1．样品制备 自心脏取血，血液置 4℃2小时，5000转 ／分离心2分钟，取血清 ‘ 样品置 4℃备用。另取心脏，后腿骨骼肌、肾脏、脾脏、肝脏、睾丸等 6种器官组织， 剪成小块，用冷生理盐水洗净血污，以每克组织 2毫升样品提取液 (O．05摩尔每升三羟 甲基氨基 甲烷一O．38摩尔每升甘氨酸，pH8．3，含蔗糖12 )置研钵中，加少量石英砂， 在冰格中研磨成匀浆，在lsooo~／分离心15分钟，取上清液加 1滴 0．1％溴酚蓝作指示 剂，即为 电泳组织样品。 2．电泳方法 采用高pH不连续系统，浓缩胶浓度为 3 ，分离腔浓度为7．5 ，电 ’置皋 自拣韩学基叠蠹劬硬 目。车文承黄文几、黄美隼两证教授审嗣，谨此蕺荫。 车文于l09O年 e胃】2日收蓟，l900年 9胃2B日謦圄。 一 l8— 维普资讯 极缓冲液均为0．005摩尔每升三羟甲基氨基甲烷一0．038摩尔每升甘氨酸，pH8．3，电泳管 为0．5x10厘米。血清样品每管加10微升，然后加 40％蔗糖 5微升，0．I％嗅酚蓝 3微 升。各电泳组织样品每管加20—40微升。采用江苏丹阳无线电一厂生产的SCR一3型稳流 稳压 电泳仪，开始时，以每管0．5毫安 电泳15分钟，然后加大到每管2毫安， 电泳 4— 5小时。电泳均在 4℃冰箱中进行。 3．固定，染色和记录 血清采用 2O 磺基水杨酸固定， 以0．15％考 马 氏亮蓝 R．R．一7％乙酸一25 甲醇液染色10小时， 以7 乙酸脱 色。 乳酸脱氢酶染色液根据薛 国雄 (1978)的配方稍作改进，37~C染色15分