第八章-组织工程与生物材料.pptVIP

第八章 组织工程与生物材料 主要内容 概述 细胞培养 支架设计及制备技术 生物微胶囊 8.1 概述 组织工程学： 应用工程学和生命科学的原理与方法,研究和开发具有生物活性的人工替代物，达到修复、维持或改善损伤组织功能的一门科学 。（Langer和Vacantil，1993年，Science） 基本方法：将在体外培养、扩增的功能相关的活细胞种植于多孔支架上,细胞在支架上增殖、分化,构建生物替代物,然后将之移植到组织病损部位,种植的细胞在生物支架逐步降解吸收过程中，继续增生繁殖，形成了新的具有其原来特殊功能和形态的相应组织和器官，达到修复创伤和重建功能的目的。 1.特定组织的细胞 特定组织的细胞是指从供体组织的健康部位 收集个体细胞，分离后，再移植到患者所需要的部 位。 细胞移植与整个器官移植相比具有明显的优势： 仅仅需要很少量的供体细胞就可进行移植； 活的供体不必牺牲整个器官； 分离细胞的用处可以排除易发生免疫反应的细胞 类型； 最后，整个费用也得到了降低。 2. 细胞生长因子 在组织器官的再造中，各类组织诱导因子、生 长因子和血管形成刺激因子将有利于组织的形 成。 例如，促进骨细胞的分化与再生的是一些 蛋白质生长因子，其中起主要作用的是骨形态发 生蛋白(BMP)。 这种活性蛋白质可诱导血管周围游动间充质细胞转转化为不可逆性骨系细胞． 3. 组织工程支架材料（细胞载体材料） 分离的细胞自身不可能形成组织，它们需要特殊的环境，通常包括细胞生长临时的支架材料。这种三维支架材料常常模拟其自然对应物一体内的细胞外基质(ECM)，它们既起物理支架的作用，又是实质细胞在体外培养和后期植入的粘附物质。 8.2 细胞培养 细胞培养是指从体内取出的细胞或组织在模拟体内生理环境，于无菌、合适温度和一定营养条件下在体外培养，使其生存、生长、增殖，并保持其结构和功能的方法。 它包括从活体中取出的细胞或已建立的细胞系在体外培养生长、增强，但不再分化为组织。 一、细胞培养的基本条件 (一)无污染环境 无毒和无菌是保证细胞生存的首要条件。 (二)基本的营养物质 (1)所有细胞均需要的各种氨基酸 (2)含有适当的葡萄糖以维持细胞代谢及产生能量 (3)必需的维生素 (4)钠、钾、钙、镁等无机盐类及Fe、Zn、Se等微量元素 在大多数培养基中需加入血清，如小牛血清等。 为了防止细菌感染，有时加入适量的抗生素(如青、链霉素)。 (三)温度 最适宜温度为35—37?C。偏离此范围，细胞的正常代谢和生长受影响。一般来说，细胞对低温的耐受力较高温强。温度不低于0 ?C时，细胞 代谢随温度降低而减慢，对细胞无伤害作用，一旦再置于37 ?C培养，细胞仍能生长。 如温度降至冰点以下时，细胞可因胞质结冰而死亡，但如向培养基中加入保护剂(二甲基亚砜 DMSO或甘油)，封入安瓶中，即可在液氟中冷冻储存(温度达一196 ?C)，复苏后仍能继续生长。 （四）气体环境和氢离于浓度 所需气体主要是O2和CO2。 大多数培养细胞适宜的pH值为7.2—7.4，低于6.8或高于7.6对细胞不利，甚至导致细胞死亡。对多数细胞来说，耐受酸性较耐受碱性强，在偏酸环境中更利于细胞生长。 为维持培养基pH值的稳定，常以CO2／HCO3-和磷酸缓冲液体系来完成。 （五）渗透压 大多数细胞对渗透压有一定耐受性。对绝大多数细胞来说，最适宜渗透压为230-320mOsm/kg。 二、培养细胞的类型与生命期 (一)体外培养细胞的类型和功能 (二)培养细胞的生命期 体内细胞常处于动态平衡中，其生存期与机体寿命相一致。大多数二倍体(2n)细胞在培养中维持有限生存期，约1年左右。 在全生存期中大致经历以下三个阶段： 第Ⅰ期；即原代或初代培养期。 从体内取出组织或细胞首次在体外进行接种培养，称原代或初代培养。其细胞称原代或初代细胞。 当原代培养细胞增殖到一定密度后，需分出部分细胞进行再培养，此过程称传代。从原代培养直到第一次传代期间称原代培养期，一般持续约1－4周。原代培养细胞呈二倍体核型，与体内细胞性状相似，是较好的实验材料。 第Ⅱ期：即传代期。 原代培养细胞一经传代后即称细胞系(cell line)。此期持续时间最长，细胞增殖旺盛并能维持二倍休核型。呈二倍体核型的细胞系称二倍体细胞系。 为保持二倍体细胞性质，细胞宜在原代培养期或传代早期冻存保种。如不冻存则需反复传代而有可能丧失二倍体性质，当传代30－50次后细胞进入第Ⅲ期。 第Ⅲ期：衰退期。 细胞虽然生存