绒毛染色体制备方法绒毛来源于胚胎的中胚层.pdf

中国试剂网 3.8.3.7 绒毛染色体制备方法 绒毛来源于胚胎的中胚层，最早的初级干绒毛出现于孕三周初，孕 8 周左右 是绒毛发育最旺盛时期。目前国内外绒毛取材多选于 8-9 周。研究资料表明，绒 毛取样不影响胚胎的发育及胎盘的功能。但取样的失败可导致胚胎丢失而终止妊 娠。 绒毛取样前者首先要检查阴道分泌物以判别阴道的洁净度，防止取样导致宫 内感染。其次需做 B 超检查，一是确定胚胎大小，二是确定胚芽有无心血管搏 动，三是确定胚芽在子宫内的位置，用以判别取材时间，是否取材及取样器进宫 的角度及深度。 1、 实验材料 妇科阴道冲洗物品、绒毛取样器、5ml 注射器、培养皿、小镊子、5ml 离心 管、甲酸、柠檬酸钠、冰乙酸、PMRI 1640 、秋水仙素、载玻片等。 2 、 培养液配制 PRMI 1640 10-15ml 秋水仙素 10ug/ml 1ml 3、 操作过程 （1）1‰新洁而灭冲洗阴道，用卵圆钳固定子宫颈，根据妇查及 B 超提示 选择角度及浓度探性插入绒毛取样器，当有弹性阻挡感且深度符合B 超所示时， 抽出取样器内芯，接上 5ml 注射器，抽出4-5ml ，此时，注射器内可见有血性液 体流进； （2 ）取一干净培养皿，内加PRNI 1640 5ml ，内含秋水仙素 0.06ug/ml 。慢 慢抽出取样器，将所吸出物注入培养皿内，并用 1640 冲洗注射器及取样器，混 匀。置培养箱 30-40 分钟；（3 ）挑选发育良好的绒毛放入另一小培养皿中，用预 温 37℃的 0.075M 。KCL 与 10%柠檬酸钠 1 ∶1 混合液漂洗两次。（4 ）用眼科小 剪剪碎绒毛，再将2 滴秋碱加入上途漂洗低渗液低渗 30 分钟；（5 ）加3 ∶2 的甲 醇冰乙酸固定液 0.2ml，预固定，1000rpm8 分钟，弃上清液；（6 ）加新鲜配制的 3 ∶2 固定液 3ml ；固定 30 分钟，2000rpm8 分钟，弃上清液；（7 ）第二次固定可 加 3 ∶1 甲醇冰乙酸固定液3ml 固定 30 分钟，2000rpm8 分钟，弃上清液；（8 ） 离心后，加所余体积的 60%冰乙酸，打匀，2 分钟后加等量甲醇，打匀，2000rpm8 中国试剂网 3.8.3.7 分钟，弃上清液。（9 ）3m1 3 ∶1 甲冰固定液过夜，冰水制片；（10）80℃考片2 小时，自然冷却。（11） 分带处理，观片。 八、羊水细胞培养 羊水中含有胎儿脱落的上皮细胞，可在体外培养用以分析胎儿染色体核型。 目前国内外大都采用腹腔羊膜穿刺术，妊娠 12-30 周的羊水细胞均可培养成功。 羊膜腔穿刺取羊水行染色体分析，最佳孕周为 16 周左右。因此时羊水增长快， 羊水中细胞较多，细胞培养易于生长，而且不易损伤胎儿。国内多数选择的穿刺 时间在妊娠的第 16-30 周。国外现已较多地采用妊娠早期的羊膜穿刺，但需在B 超下定位及穿刺。羊水量按妊娠时间大致计算 （1ml/w）。资料表明，穿刺病例的 妊娠结局、分娩方式、胎儿的出生体重等与未穿刺无明显差异。 1、实验材料 2,5%碘酒、75%酒精、无菌棉签和棉球、镊子、20-22 号无菌腰穿针、吸管、 培养瓶、培养液 （PRMI 1640 、199、F10 、F12 ）、小牛血清、秋水仙素、KCL、 甲醇、冰醋酸、培养皿、盖玻片等。 2 、培养液配制 F-12 85% 小牛血清 15% 双抗 100u/ml 小瓶贮藏 4-8 ℃ 3、操作过程 A （盖玻片培养法） （1）采样：选择妊娠